154245. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidrokortizon mikrobiológiai előállításának optimális kivitelezésére
3 154245 4 lek mellett kapott szín 440 nm és 480 nm közötti hullámhossz-tartományban mért fényelnyelése arányos a hidrokortizon-koncentrácíőval. Ebben a hullámhossz-tartományban a kísérő (I, III, IV) szteroidok, valamint a fermentléből az extraktumba jutó egyéb anyagok fényelnyelése gyakorlatilag elhanyagolható. A találmány szerinti eljárással tehát a hidrokortizonnkoncentráció mindenkori mennyiségét az összes szteroid-komponenst magában foglaló szteroid-extraktumból közvetlenül és viszonylag rövid időn belül meghatározhatjuk. A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint a fermentlét vízzel korlátoltan elegyedő szerves oldószerekkel, előnyösen észterekkel vagy klórozott szénhidrogénekkel, így pl. etilacetáttal, kloroformmal, etilénkloriddal extraháljuk. A tömény sósavas melegítést célszerű 60 C° és liOiO C° közötti, előnyösen 75 C° és 85 C° közötti hőmérséklet-tartományban 10—60 perc, célszerűen 25—40 perc időtartamon át végezni. Az extraktumok bepárlási maradékának tömény sósavas kezelését leforrasztással vagy egyéb úton, így pl. gumi vagy műanyag közbeiktatásával légmentesen lezárt rendszerben, előnyösen üvegcsőben célszerű elvégezni. Üvegcső alkalmazása esetén a színintenzitás mérését magában a lezárt üvegcsőben végezhetjük el. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példát adjuk meg. Példa: Absidia orchidis tenyészetbe 1000 ^g/ml-es koncentrációban hidrokortizont adagolunk. 2 óra hosszat tartó keverés és levegőztetés után 4 ml folyadékmintát veszünk, melyhez 20 ml etilacetátot adunk. A szerves fázis 1 ml-ét 15 mm 0, 100 mm hosszú, egyik végén leforrasztott, másik végéni peremmel ellátott üvegcsőben vízfürdőn szárazra pároljuk. A szárazmaradékot 5 ml 36LJ4<) / 0 -OS sósavban feloldjuk, az üvegcsövet gumidugóval bedugjuk, majd rozsdamentes acélból készült, az üvegcső peremének alsó részére támaszkodó gyűrűre szerelt csavaros szorítóval légmentesen lezárjuk. A csövet ezután 35 pere időtartamra 80- €°-os termosztált vízfürdőbe helyezzük. Ezerr idő eltelte után az 10 15 20 25 S0 35 40 45 oldatot lehűtjük, majd extinkcióját 2 = 460 nmer sósavval, mint összehasonlító oldattal szemben megmérjük. További mintákat 1 órás időközökben veszünk, és a minták extinkcióját hasonló kezelés után azonos módon mérjük. A kapott hidrokortizon-koncentráció értékeket az idő függvényében grafikusan ábrázoljuk. Az így kapott görbe emelkedésének megszűnésekor a fermentációs folyamatot leállítjuk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás pregn-4-én 17a,21-diol-3,2Q-dionból mikrobiológiai úton történő hidrokortizon előállítás optimális kivitelezésére, azzal jellemezve, hogy a fermentléből időközönként vett mintákat szerves oldószerrel extraháljuk, az extraktumok bepárlási maradékát legalább 20%-os, célszerűen 2i8—37%-os töménységű vizes sósavoldattal 15 C° feletti hőmérsékleten kezeljük, a keletkezett sárga színű oldat színintenzitását fotometrikusan mérjük, és a fermentációs folyamatot akkor állítjuk le, amikor a mért színintenzitással arányos hidrokortizon koncentráció-érték lényegileg megegyezik a kiindulási pregn-4-én-17a,21-diol-3,2i0-dion mennyisége alapján számított értékkel. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a fermentlevet vízzel korlátoltan elegyedő oldószerekkel, előnyösen észterekkel vagy klórozott szénhidrogénekkel extraháljuk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az extraktumok bepárlási maradékának tömény sósavas melegítését leforrasztással vagy egyéb úton légmentesen lezárt rendszerben, célszerűen üvegcsőben folytatjuk le. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a színintenzitás mérését magában a lezárt üvegcsőben végezzük el. 5. Az . 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a tömény sósavas melegítést 60 C° és 100 C° közötti, célszerűen 75 C° és 85 €° közötti hőmérsékleten, 10 perc és 60 pere közötti, célszerűen 25 perc és 4§ perc közötti időtartamon át végezzük, A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6806162. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 2
