154228. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikus hatású anyagok előállítására
154228 17 18 A táptalajt 1000 ml-es üvegben helyezzük el és beoltás után 45 C°-on állandó erőteljes keverés mellett, rázógépen, 16 órán át inkubáljuk. Ez alatt az idő alatt az organizmus erőteljes növekedésnek indul. Két, a fentiek szerint inkubált lombik tartalmát 500 ml^es, az alján tabulátorral felszerelt, 150 ml steril vizet tartalmazó átoltó üvegbe gyűjtjük. Az inokulum-átoltó lombik teljes tartalmát 378 l-es (100 gallonos), rozsdamentes acélból készült fermentorba visszük, mely az alábbi módon elkészített táptalajt tartalmazza: Szabályozható keverővel, levegőztetővel, valamint hőmérsékletszabályozóval ellátott 194,60 1 (25 gallon) tiszta csapvizet tartalmazó, rozsdamentes acélból készült fermentorba az alábbi komponenseket adagoljuk: Burgonyakeményítő 1500 Enzimatikusan hidrolizált kazein 750 Enzimatikusan hidrolizált szójababliszt 300 Autolizált élesztő vízoldható frakciója 300 Mannit 750 Magnéziumszulfát • 7 H2 0 30 Ferroammónszulfát • 6 H2 0 1,5 Cinkklorid 315 10 15 20 Manganoklorid • 4 H2 0 Rézszulfát-5 H2 0 Kobaltnitrát-6 H2 0 Bórsav Szilikon emulzió 270 mg 45 mg 75 mg 90 mg 2,5 g A táptalaj térfogatát az összes komponens feloldódása után csapvízzel 150 literre (40 gallon) töltjük fel és pH-ját kb. 60 ml 5 n káliumhidroxid oldattal 7,2-re állítjuk be. A fermentort ezután lezárjuk és tartalmát 120 C°-on 30—40 percen át sterilezzük. A táptalajt ezután 48 C°-ra hűtjük és a fent ismertetett módon beoltjuk. A fermentációs elegyet beoltás után 0,849 m3 /perc (3 köbláb/perc) steril levegőárammal levegőztetjük és 400 fordulat/perc tengelysebesség mellett keverjük, miközben a hőmérsékletet 48 C°-on tartjuk. g A hab szabályozása megfelelő mennyiségben g alkalmazott steril szilikon-emulzió 2,5%r-os szuszg penziójával történik. A fermentáció során kb. 3000 ml habgátló-szuszpenzió adagolására van g 25 szükség. A 12. órától kezdve óránként, aszepg tikusan mintákat veszünk, melyek in vitro g aktivitását meghatározzuk. A kapott eredmég nyéket az alábbi táblázatban tüntetjük fel; a mg maximális aktivitás 18—20 óra alatt érhető el: Felhasznált mikroorganizmus 13 14 A fermentlé kora órákban 15 16 17 18 19 20 Fermentlé aktivitása, egység/ml Staphylococcus aureus (82) Sarcina lutea (PCI) Cacillus sp. (TA) pH 7,0 6,6 470 650 800 950 1100 1100 680 800 900 950 1000 1800 6,5 6,6 6,8 6,7 6,9 7,1 A fenti eljárást 10-szer megismételjük, a kapott fermentleveket egyesítjük, a pH-t 6-ra állítjuk be, az egyesített fermentleveket szűrjük és a kapott szűrletet 30,5 cm {12") átmérőjű, 3,35 m (11 láb) magas extrakciós kolonnán ellenáramban 484 liter/óra (1.28 gallon/óra) sebesség mellett hasonló sebességű butanolárammal extraháljuik. A vízoldható komponensek eltávozásának minimumra csökkentése céljából az extrakciós oszlop tetején a butanol-áram mennyiségéhez viszonyítva 0,2-szeres térfogat mennyiségű vizes visszamosást alkalmazunk. A butanolos extraktot kb. 5%-os oldattá töményítjük be és a kapott koncentrátumot 7,6 cm (3") átmérőjű, 6,1 m (20 láb) magas frakcionáló folyadék-extrakciós oszlop közepén tápláljuk be. Az oszlopon alkalmazott víz-butanol arány kb. 10 : 1 és a terméket a butanolos extrakt tartalmazza. A butanolos oldatot kb. 5—20% szilárd anyagot tartalmazó oldattá vagy péppé pároljuk be, majd kb. 25—50 térfogat 45 mennyiségű n-hexánt adunk hozzá és a keletkező szuszpenziót leszűrjük. A kapott termék vákuumban való szárítása után szilárd vegyülethez jutunk. 50 55 60 65 2. példa: Egy sorozat fermentorban az 1. példában ismertetett alap-táptalajt készítjük el és a beoltást az ott leírt módon végezzük el azzal a különbséggel, hogy a táptalajban hidrolizált szójafehérje és vizes élesztőextrakt helyett különböző, kereskedelmi, enzimatikusan hidrolizált szójafehérjéket és teljesen szárított élesztőket, élesztőextraktokat vagy élesztő-autolizátumokat alkalmazunk. Egy kivételével az összes táptalaj jó fermentlé-aktivitást mutat, míg számos táptalaj észrevehetően magasabb aktivitással rendelkezik, mint azt az alábbi táblázat igazolja: 9
