154186. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunokémiai reagensek előállítására

154186 -szuszpenziót egy üveg-tárgylemezen spatulával összekeverünk és egy 2,5—3 cm átmérőjű kerek' felületen: szétkenjük. Ezután az üveg-tárgylemezt enyhén ferde helyzetben tartva, lassan egyik oldaláról a másikra forgatjuk. 1—2 perc múlva a részecskék agglutinálódnak, ami szabad szemmel is jól látható. Agglutináció-inhibitálási reakció esetén a fenti eljárás során a fiziológiás sóoldat helyett a megfelelő antigéntoldatot alkalmazzuk. 1—2 perc elteltével az üveg-tárgylemezt víz-Szintes felületre helyezzük és a reakcióelegyet megszáradni hagyjuk. Az agglutinálódás bekövetkezte vagy be nem következte a megszáradt reakcióelegyen is jól látható. Az így megszárított tárgylemezt meg is őrizhetjük a reakció eredményének regisztrálása céljából. b) A reakció egy másik kiviteli módja esetében centrifugálással dolgozhatunk az alábbi módón: 0,5 ml fiziológiás sóoldatot vagy antigén-oldatot .0,5 ml antiszérummal kezelünk, az antiszérumot 0,15 mólos, 7,8 pH-értékű és 0,1% bovin szérumalbumint is tartalmazó imidazol-pufferoldattal megfelelően hígított állapotban alkalmazzuk. Ehhez az elegyhez 1 csepp látex-szuszpenziót adunk, fiziológiás sóoldattal ötszörösre hígított állapotban. Az elegyet azután 1 óra hosszat inkubáltatjuk 37 C° hőmérsékleten, majd percenként 1500 fordulattal 10 percig centrifugáljuk. Ha ezután a szupernatáns folyadék zavaros, az azt mutatja, hogy agglutináció nem következett be; tiszta oldat az agglutináció bekövetkezését mutatja. Az agglutináció láthatóvá tételére különféle módszereket többek között K. J. Bloch, Bull. Rheum. Dis. 9, 185 (1959) és L. Fleck és mtsai, Nature 194, 548 (1962) írtak le. A fenti példa szerint előállított látex agglutináció ja csak specifikus antiszérumok hatására következik be; az agglutináció 2 NE/ml koncentrációjú chorion gonadotrop hormonnal ínhibitálható, ami e reagens nagyfokú érzékenységét bizonyítja. 2. példa: Az 1. példában leírt eljárással két szuszpenziót készítünk, a megadott összetételű, 4% szacharózt és 0,01% mertiolátot tartalmazó borát-pufferoldattal. E szuszpenziók egyikét 20 óra hosszat inkubáltatjuk 56 C° hőmérsékleten, a másikat 1 óra hosszat, de 100 C° hőmérsékleten inkubáltatjuk. Az így kapott szuszpenziók kizárólag . a specifikus antiszérumok hatására agglutinálódnak. Az agglutinációs reakció 1 NE/ ml koncentrációjú chorion gonadotrop hormonnal inhibitálható. A két szuszpenzió közül az utóbbi bizonyult érzékenyebbnek. 3. példa: „Bactolatex 0,81" szuszpenziót äz 1. példában leírt módon előérzékenyítettünk bovin szérumalbuminnal, majd 60 G° hőmérsékleten 2 óra hosszat inkubáltattuk. A részecskéket azután chorion gonadotrop hormonnal érzékenyítettük, majd ismét 2 óra hosszat inkubáltattuk 5 60 C° hőmérsékleten. Az így előállított reagens is rendkívül specifikusnak és igen érzékenynek bizonyult az agglutinációs, ül. agglutináció-inhibitálási reakciókban. 10 4. példa: Az 1. példában megadott minőségű látexet az 1. példában leírt módon bovin szérumalbuminnal előérzékenyítettük, majd chorion gonadotrop 15 hormonnal 45 C° hőmérsékleten 180 percig tartó kezelés útján érzékenyítettük. Az így készített reagens kizárólag a specifikus antiszérum hatására agglutinálódik és igen érzékeny. 20 5. példa: 10 ml „Bactolatex 0,81" látex részecskéit centrifugálás útján kiülepítjük, majd 5 ml 0,14 25 mólos, 8,3 pH-értékű és 4 mg/ml bovin szérumalbumint is tartalmazó borát-pufferoldatban ismét szuszpendáljuk őket. A szuszpenziót homogenizáljuk, majd azonnal ismét hozzáadunk 5 ml oly fenti minőségű pufferoldatot, amely 200 30 NE/ml chorion gonadotrop hormont is tartalmaz oldott állapotban. Újbóli homogenizálás után a szuszpenziót 90 percig hagyjuk állni 20 C° hőmérsékleten. A részecskéket azután újból kicentrifugáljuk és a fenti minőségű puffer-35 oldat 20—20 ml-jével kétszer mossuk. A mosott részecskéket azután ismét szuszpendáljuk 0,07 mólos, 8,3 pH-értékű, 4% szacharózt és 0,01% mertiolátot is tartalmazó borát-pufferoldatban, majd a szuszpenziót 10 óra hosszat inkubáltat-40 juk 56 C° hőmérsékleten. 6. példa: 45 20 ml Bactolatex részecskéit kicentrifugáljuk, majd 20 ml 0,14 mólos, 8,3 pH-értékű, 2 mg/ml bovin szérumalbumint is tartalmazó börát-pufferoldatban szuszpendáljuk. A szuszpenziót az 1. példában leírthoz hasonló módon inkubál-50 tatjuk, centrifugáljuk és mossuk, majd a mosott részecskéket ismét szuszpendáljuk 20 ml oly fenti összetételű pufferoldatban, amelyhez 100 gamma/ml humán növekedési hormont is adtunk. A szuszpenziót ezután 2 óra hosszat állni 55 hagyjuk 20 C° hőmérsékleten, majd a részecskéket ismét kicentrifugáljuk és 30—30 ml fenti pufferoldattal kétszer mossuk. Az így kezelt látexet azután 14 ml 0,07 mólos, 8,3 pH-értékű, 4% szacharózt és 0,01% mertiolátot is tartal-60 mázó borát-pufferoldatban szuszpendáljuk. Az így érzékenyített részecskék csak specifikus antiszérummal agglutinálhatok. Ez az agglutinálódás a humán növekedési hormonnal 0,5 gamma/ml koncentrációban már inhibitál-85 ható. 4