154056. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és készítmény transzamináz-aktivitás meghatározására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1966. I. 05. (AE—197) Német Demokratikus Köztársaság-beli elsőbbsége: 1965. III. 30. Közzététel napja: 1967. IV. 22. Megjelent: 1-968. III. 15. 154056 Szabadalmi osztály: 42 1 3 Nemzetközi osztály: G 01 n Decimái osztályozás: Feltalálók: v Dr. med. habil. Wagenknecht Claus Berlin-Treptow, Hasart Egon, Berlin, Dr. med. habil. Anders G., Falkensee/Krs. Nauen, Német Demokratikus Köztársaság Tulajdonos: VEB Arzneimittelwerk Dresden, Radebeul, Német Demokratikus Köztársaság Eljárás és készítmény transzamináz-aktivitás meghatározására 1 A találmány tárgya eljárás és készítmény az emberi és állati szervezet extrái- és intraceiluláris folyadékában levő transzaminázhaktivitiás kimutatásiára. ós meghatározására. Ismeretessé váltt az, hogy a glutamát-OKálaoe- 5 tát-itranszamkiáz (GOT) .az aszpartát és az; alfaketoglutarát, valamint az oxálacetát és a glutamát között levő kémiai egyensúly beállását katalizálja. A glutamát-piruvát-transzamináz (GPT) pedig egyrészt az alanin és alf a-ketoglutarát, más- 10 részt a piruvát éts glutaimát között levő kémiai egyensúly beállását katalizálja. A tiranszaimniáz,aktivitások mérőláncban optikai kísérletben azáltal határozhatók meg, hogy az aminosavból képződött ketosav a GOT szempontjából segéd- 15 enzim felhasználásával a malátdtehidrogieniázzal és a redukált nikotimaimid-aideninnukleoitiddel (NADH2) együtt maláttá, a GPT szempontjából pedig lakMtdehidrogengázzial és NADH2-vel együtt laktatta alakítható át. Egy miásik mód- 20 szer azon alapszik, hogy a ketoisiavak a fenilhidrazinnal foitornéteneseni mérhető színezékkomplexszé alakíthatók át és így az aktivitásmérés: szintén lehetővé válik. A siegtédenzimekkel dolgozó eljárások hátra- 25 nya az, hogy a mérés kivitelezéséire az; ibolyántúli tartományban (340, ill. 366 nm) az extinkcióváltozást az időegység alatt mérő optikai berendezéseik sízükiségesek, így a mérés lefolytar tása csak megfelelően felszereli laboratóriu- s0 mokban lehetséges, A fenillhidtrazinnal dolgozó eljárások hátránya pedig azi, hogy a reakció kinetikailag nem követhető, ezenkívül a mérés idő- és munkaigényes,. A fentiekből adódik az a feladat, bogy a transziaminázs-aktivitiást UVJsészülék1, ill. más fotométerek nélkül egyszerű eszközökkel lehessen kinetikailag is mérni. A találmány f eladálta tehát a kinetikailag csak az ibolyántúli tartományban követhető reakciót a látható fény huMá'rrAoissz-tiartoimánytaan lefolyó, emberi saemimel érzékelhető reakcióvá átalakítani. A feladat megoldása úgy vált lehetővé, hogy a reakciót a találmány szerinti miérőlánc segítségével követjük. A mérőMnic segédenzimmel, vagyis glutamátdehiidrogenázzal és a fenazinmetoszultfát és diklárfenilindofenol (DCPIP) színiezékanyagokkal dolgozik. A trainszainináz reakciónál képződő glutamátot a találmány szerint a gltutamiátdeihidirogie^ názaal és a nikotintamiid-adenin-dinukleoitid segiédenzimmel alfiaHketoglutarráttá oxidáljuk. Ekkor NA.DH2 képződik. Az a NADH2 -t á színezékrendszerhez való kapcsolással oxidáljuk, mikoris a sziínezékriendszer a hidrogént felveszi. A DCPIPnnek leukoszmezékké való redukciója tehát megfelelő a tranisaamináz aktivitásnak. Ily módon ezen mérőlánc bekapcsolásával exakt aktivitásimeghatiározás válik lehetővé. 154056
