153835. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikumok előállítására
1538 zője, hogy Staphylococcus aureussal szemben nagyon aktívak. Ezenkívül igen hatásosak a gram-pozitív és gram-negatív baktériumok, pl. Aerobacter aerogenes, Mycobakíérium phlei, Proteus vulgaris, Sarcina lutea PCI—1001 szá- 5 mos osztályaival szemben is. A találmány szerinti antibiotikumok ennek folytán alkalmasak baktériumok, pl. Staphylococcus aureus okozta fertőzések leküzdésére. A tisztított antibiotikum-elegy is felhasználható 10 gyógyászati célokra. A találmányunk tárgyát képező eljárással előállított termékek gyógyászati készítmények alakjában felhasználhatók, melyek a hatóanyagokat vagy sóikat enterális vagy parenterális adago- 15 iásra alkalmas szerves v. szervetlen inert vivőanyagokkal, mint víz, zselatin, tejcukor, keményítő, magnéziumsztearát, talkum, növényi olajok, gumi, polialkilénglikolok, vazelin, stb. keverve tartalmazzák. A gyógyszerkészítmények ^0 szilárd (tabletták, drazsék, kúpok, kapszulák), vagy folyékony (oldatok, szuszpenziók, emulziók) formában készíthetők. A készítmények adott esetben sterilek, és/vagy segédanyagokat, pl. konzerváló, stabilizáló, nedvesítő, vagy emui- 25 geáló segédanyagokat, az ozmózisnyomás változtatását szolgáló sókat vagy pufferanyagot tartalmazhatnak. A készítmények továbbá egyéb gyógyászatilag értékes anyagokat is tartalmazhatnak. ,Q Eljárásunk további részleteit a példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa: , ,A Streptomyces hazeliensis törzs spóráit paradicsom-zabliszt-agaron, palackokban vagy fagyasztott száraz állapotban tároljuk, mimellett a spórákat 10% marhaszérumban vagy 10% An sovány-tejben szuszpendáljuk. 6 literes rázópalackban, 3 liter 1% borsódarát, 1% kukoricakeményítőt, 0,1% kalciumkarbonátot, 45 0,1% dikáliumfoszfátot, 0,1% disznózsírt, tartalmazó vizes tápoldatot töltünk, melyhez vizes spóraszuszpenziót adunk és rázógépen 28— K _ 30 C°-on 3—5 napig (percenként 200 fordulat) keltetjük, míg élénk növekedés áll be. A keltetést oly edényben kivitelezzük, mely a tápoldat levegőztetésére alkalmas, pl. a fent említett palackban, vagy gázmosópalackban. Az r ily módon nyert oltóoldattal 250 1 vizes tápoldatot oltunk be 400 literes fermentáló tartályban. A tápoldat összetétele: 3% borsódara, „„ 0,1% kalciumkarbonát, 0,1% dikáliumfoszfát, 0,03% szilikonpaszta (Dcw-Corning Silikon A paszta), 0,1% disznózsír. 65 11 E tápoldat helyett az előző összetételű tápoldat 250 literét is használhatjuk. Az erjesztő tartályt 3—4 napig 28 C° hőmérsékleten tartjuk. A levegő mennyisége 225 l/p. Ez alatt az idő alatt a viszkozitás észrevehetően nő, rnig a pH érték 6,6-ról 5,9-re csökken. Az ily módon nyert inokulumot 35 000 literes erjesztőkádba visszük, mely 23 000 1 sterilizált, alábbi összetételű tápoldatot tartalmaz: 3% őrölt borsódara, 0,1% kalciumkarbonát, 0,1% dikáliumfoszfát és 0,03—0,05% Dow-Corning Silikon A szuszpendálva, 0,1% szójababolajban. Az oldatot 5—8 napon át 28 C°-on fermentáljuk. A fermentációt in vitro vizsgálattal ellenőrizzük. Az első 24 órában a levegő mennyiségét 700 l/p értékre állítjuk be. a következő 24—72 órában 2800 l/p, és az ezt követő 72— 168 órában 4000 1/p-re emeljük. Végül a pH-t 85%-os szirupszerű foszforsavval 3,9-re állítjuk be. 750 kg diatomaföld hozzáadása után a savas oldatot szűrjük. A szűrőlepényt 7500 1 n-butanollal feliszapoljuk és erőteljesen kavarjuk, majd éjjelen át pihentetjük. A centrifugálással nyert, átlátszó butanolos extraktot 1482 ml 50%-os NaOH oldattal pH = 7-re semlegesítjük és kíméletesen, csökkentett nyomáson 50 C° alatti hőmérsékleten 200 1 térfogatra betöményítjük. E koncentrátumot élénk kavarás közben 1000 1 petroíéterbe (forrponthatár: 60—90 C°) keverjük be. A kicsapódó nátriumsó feltételezhetően az antibiotikum-elegy savas és részint semleges formában levő komponenseinek elegyéből áll. A nyers nátriumsót centrifugáljuk, majd szárítjuk. 2. példa: A nyers nátriumsó tisztítása a) Oldószer és pufferoldat közötti megosztással A fent nyert nyers nátriumsó 50 g-ját 1 I metanolban szuszpendáljuk és 30 percig keverjük. A nem oldódó részt leszűrjük és a szürletet csökkentett nyomáson bepároljuk, míg sűrű szirupot nem nyerünk. Az utóbbit 25 ml metanolban és 625 ml 0,1 n sósavban szuszpendáljuk. A szuszpenziót 3-szor másfél-másfél liter éterrel kirázzuk. Az egyesített éterextraktumokat (4,24 liter) 2-szer 1,1 liter 1/15 mólos (pH = 6,2 értéken), majd 2-szer 1,1—1,1 liter 1/15 mólos (pH = 7 értéken) foszfátpufferrel extraháljuk. E műveletnél az aktivitás csak kevéssé csökken. Ezután az éteres oldatot 2-szer 1,1—1,1 liter 1/15 mólos (pH = 7,8 értéken) foszfátpufferrel extraháljuk, mire az antibiotikum-elegy a vizes fázisba vándorol. A szuszpenziót pH — 7,0-ra állítjuk és n-butanollal extraháljuk, miközben a csapadék feloldódik.
