153740. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 vitamin előállítására
153740 szennyvíziszap-inokulum nélkül kezelt fermentlevet mint inokulumot, és 8000 ml 28—30 C°-os csapvizet, amiben a következő táptalajkomponensek vannak oldva ill. szuszpendálva: 20 g melasz 50 g pékélesztő hidrolizátum 20 ml 10%-os májextraktum 50 g kukoricalekvár 30 g ammóniumhidrogénkarbonát (NH4 HC0 3 ) 10 ml ammóniumhidroxid (NH4 OH) 1 g magnéziumklorid (MgCl2 ) 10 mg 5,6-dimetilbenzimidazol 100 mg Co(N03 ) 2 • 6H2 0 100 mg glicin 100 mg borostyánkősav 200 mg nátriumhidroklórszulfit (NaHS03 ) 40 mg o-xilidin 10 mg szuperfoszfát 60 ml metanol A fenti anyagok beadása után alaposan felkeverjük a férmentlevet, majd gumilappal lefedjük. Az üvegedényt 28 C°-os termosztátba helyezzük és naponta felkeverés közben 60 ml metanolt adunk bele. Inkubációs idő elteltével a fermentlevet feldolgozzuk, a B12 vitamint papírkromatografálás után spektrofotometriásán mérjük. A fermentlé 6200 gamma/liter B12 vitamint és 18 000 gamma/liter Bí2 vitaminszerű faktort tartalmaz. A napi termelés 1240 gamma/liter B12 vitamin és 3600 gamma/liter B12 vitaminszerű faktor. 2. példa: Félfolyamatos fermentáció A fermentáció indítása, táptalaj összetétele és kezelése a fermentáció ötödik napjáig mindenben megegyezik az 1. példában leírtakkal. A fermentáció hatodik napján a fermentlé alapos megkeverése után össztérfogatának 1/10 részét levesszük, s helyére 1 liter 28 C°-os csapvízben az 1. példában leírt tápanyagok 1/10 részét — a metanol kivételével — betápláljuk. A metanol mennyisége naponta 48 ml. 10 A levételt és betáplálást naponta ismételjük. A naponta levett 1 liter fermentlevet feldolgozzuk, a B12 vitamint papírkromatografálás után spektrofotometriálisan megmérjük. Keletkezett 6000 gamma/liter B12 vitamin és 16 500 gamma/liter B12 -hatású faktor; a napi termelés tehát 600 gamma/liter B12 vitamin és 1650 gamma/liter B12 vitaminszerű faktor. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás BJ2 vitamin és B 12 -hatású faktorok előállítására szennyvíziszapból származó baktériumpopulációval, metanoltartalmú tápkö-15 zegben folytatott szeptikus fermentáció útján, amelyre jellemző, hogy a szennyvíziszapból származó vegyes baktériumpopulációt további szennyvíz-adalék nélkül, egy előző fermentáció kiérett levének friss metanoltartalmú tápkö-20 zegbe való átoltása útján legalább öt — a baktérium-populációtól függően esetleg több — fermentációs műveletben adaptáljuk a szennyvíz-iszap-adalék nélküli tovább szaporodáshoz, majd a termelő fermentációkat ugyancsak me-25 tanoltartalmú tápközegben, mindig egy előző fermentáció kiérett levéből vett inokulummal, a szennyvíziszap teljes kikapcsolásával folytatjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli 30 módja, amelyre jellemző, hogy energiaforrásként metanolt, nitrogénforrásként kukoricalekvárt, valamint szervetlen ammónium-vegyületeket, növekedési faktorokat és a szokásos szervetlen sókat tartalmazó tápközeghez kal-25 cium-ionokat szolgáltató adalékot, pl. kalciumszulfátot vagy előnyösen szuperfoszfátot adunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy a fermentációt a 151.065 sz. magyar szabadalmi le-40 írásban ismertetett tápközeg alkalmazásával, előnyösen kalciumtartalmú adalékkal folytatjuk. 4. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy 45 a prekurzorként alkalmazott 5,6-dimetilbenzimidazolt részben — célszerűen V2—% részben — o-xilidinnel helyettesítjük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6707592. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest, V., Balassi Bálint utca 21—23. 4
