153740. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 vitamin előállítására
153740 a folyamat reprodukálhatóságának s így az egyenletes fermentációnak is feltétele. d) Az iszap szennyes üledékanyagai kellemetlen ballasztot jelentenek a fermentációs termék feldolgozása során; az iszap anyaga nagyon víztartó, nehezíti a fermentációs termék szűrését és egyéb feldolgozási veszteségeket is okoz. A szennyvíziszapból kiinduló szeptikus fermentáció során eddig a friss szennyvíziszap-inokulum minden egyes fermentációs műveletben való alkalmazását nélkülözhetetlennek tartották; azt tapasztalták ugyanis, hogy ha csupán egy előző fermentáció termékéből vett inokulumot alkalmazunk, friss szennyvíziszap hozzáadása nélkül, akkor a fermentáció B12 vitamin-hozama — egyébként azonos táptalaj alkalmazása esetén — erősen csökken. A szennyvíziszapos fermentáció fentemlített hátrányainak kiküszöbölésére folytatott kísérleteink során arra a meglepő felismerésre jutottunk, hogy a friss szennyvíziszap hozzáadása nélkül, csupán az előző fermentáció során kapott lé inokulumként alkalmazásával, megfelelő metalon-tartalmú tápközeggel folytatott sorozatos további fermentációk során a B12 vitamin hozama csak átmenetileg csökken. Sorozatos átoltás után a fermentáció B12 -hozama nemcsak eléri, hanem lényegesen meg is haladja a friss szennyvíziszap-inokulum alkalmazásával végzett fermentációval elérhető szintet. Ez azt mutatja, hogy a szennyvíziszap B12 vitamint termelő vegyes mikroorganizmus-populációja nemcsak adaptálható a megfelelő metanoltartalmú tápközegben — további szennyvíziszap-inokuium hozzáadása nélkül — lefolytatásra kerülő sorozatos fermentációhoz, hanem ennek során a mikroorganizmus-populáció B12 vitamintermelő képessége még számottevő mértékben növekszik is. A további szennyvíziszap nélküli fermentációhoz való adaptálódás során a szennyvíziszap eredeti mikroorganizmus-populációja azonban fokozatos átalakuláson megy keresztül és az eredeti túlnyomóan baciHusjellegű populáció helyébe fokozatosan egy coccusokat és bacillusokat vegyesen tartalmazó populáció lép. A friss szennyvíziszap-inokuium nélküli, csupán az előző fermentáció kiérett levéből vett inokulummal lefolytatott sorozatos kísérleti fermentációk során fokozatosan adaptálódó és átalakuló mikroorganizmus-populáció B12 vitamin hozamának alakulását — a szokásos módon, friss szennyvíziszap és az előző fermentációból vett inokulum egyidejű adagolásával lefolytatott kísérleti üzemi fermentációk B12 -ho~ zamával összehasonlítva — az alábbi táblázat mutatja. A táblázatban megadott B12 -hozamok a fermentációs lének a fermentáció ötödik napján. papírkromatográf iával meghatározott cianokobalamin tartalmát mutatják. B12 vitamin gamma/liter 10 15 20 a 5 40 45 50 55 60 65 Fermentáció iszapiszapada sorszáma adagolással lás néli 1. 4244 3544 2, 3560 4200 3. 5400 6120 4. 7000 7360 5. 5420 7000 Hasonló eredményeket kaptunk termelő üzemben, 500 m3 -es ipari fermentorokban egy éven át folytatott kísérleti fermentációk során is. A szennyvíziszap-inokuium nélküli fermentációhoz adaptált mikroorganizmus-populáció B12 vitamint termelő képessége száznál több sorozatos fermentáció után is változatlanul megmaradt és a fermentációk átlagos B12 -hozama 23%-kal volt magasabb, mint az egyébként ugyanolyan körülmények között, de az eddig ismert módszerrel, friss szennyvíziszap-inokulummal lefolytatott ipari fermentációké. A találmány tárgyát tehát olyan eljárás képezi a cianokobalaminnak és egyéb B12 vitaminhatású faktoroknak metanoltartalmú tápközegben, szeptikus körülmények között lefolytatott fermentáció útján történő előállítására, amelynek során a szennyvíziszapból származó vegyes baktériumpopulációt további szennyvíz-adalék nélkül, egy előző fermentáció kiérett levének friss metanoltartalrnú tápközegbe való átoltása útján legalább öt — a baktérium-populációtól függően esetleg több — fermentációs műveletben adaptáljuk a szennyvíziszap-adaiék nélküli továbbszaporodáshoz, majd a termelő fermentációkat ugyancsak metanoltartalmú tápközegben, mindig egy előző fermentáció kiérett levéből vett inokulummal, a szennyvíziszap teljes kikapcsolásával folytatjuk. Az ilyen, mindenkor egy előző fermentációból vett inokulummal beoltott, szennyvíziszap-adaiék nélküli termelő fermentációk egymást követő sorozatban gyakorlatilag korlátlanul továbbfolytathatok; a szennyvíziszap nélküli tápközeghez már adaptált mikroorganizmus-populáció B12 vitamint termelő képessége megfelelő tápközegben korlátlanul megmarad. A találmány szerinti iszapadalék nélküli, előző fermentációból vett inokulummal beoltott B12 vitamintermelő fermentációhoz tápközegként az egyébként szokásos, pl. a 151.065 sz. magyar szabadalmi leírásban ismertetett metanoltartalrnú tápközeg használható, amely a metanol mellett nitrogén- és széntartalmú szerves tápanyagokat, mint élesztőkivonatot, glicint, borostyánkősavat, ammóniumhidroxidot, szervetlen sókat és prekurzorként 5,6-dimetilbenzimidazolt tartalmaz. Azt találtuk továbbá, hogy a találmány szerinti módon, szennyvíziszap-inokuium nélkül, metanoltartalrnú tápközeggel lefolytatott B12 -termelő fermentáció B12 -hozama még további lényeges mértékben növelhető, ha a tápközeghez kalcium-ionokat szolgáltató adalékot, te-2
