153665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
Is 153665 16 3. térc-bűliloxikarbanil-D-szeril-D-tiriozll-L-szerif-L-mef íafiil- (gamma^terc.butil)-L-glutamil-I^hisztidil-L-f enilalanil-Lr-arginil-L-triptofanil-glicin A fenti hidrazidot az 1. példa 8. pontjában leírthoz hasonló eljárással ^.amma-teré.butil-L-glutamil-I^his^dil-I^fen'ilalanil^LHarginil-HL-ixiptoffanil-glicimiel reagáltatva a megfelelő dekápeptidet kapjuk, amely 193°-on bomlás közben olvad; [a]D = —16 ±2° i(e = i 50%-os piridinben). A vékonyrétegű kromatogram,: az alábbi Rf-.értékeket mutatja: R'fioi == 0,6; RÍ52 = 0,3. 6. tericButiloxikiarbonil-D-szeril-D-tirozil-L-szeril^L-metionil-(gamma-terc.butil)-L-glutam:il-L-hisztidil-L-.fenilalanil-L-argi,nil-L-triptofanil-glicil-terc.butiloxikarbonil-L-lizil-L^prolil-L-valil-gliicil-terc.butiloxikarbonil-L-lizil-terc.butiloxikar'bonil-L-lizil-Lnarginil-L-arginil-L-prolil-L-valil-terc.butiloxikarbonil-L-lizil-L-valil-L-tiroálnLr-prolin-tercbiutilészter 0,725 g terc.butiloxikarbonil-D-szeril-D-tiro-zÍl-L-sizeril-L-metionil-(gammia-t&rc.butil)-L- ' -glutamil-I^hisztidil-L-fenilalaniPL-arginil-L-triptofanil-glicint (0,5 millimól) és 1,11 g (0,5 millimól) gamma-terc. butiloxikarbonil-L-lizil-L-prolil-.L-valil-glicil-terc.butiloxikarbpnil-L-lizil-terc.butiloxilkartoonil-L-lizil-L-iarginil-L-arginil-L->arginil-.L-prolil^L-valil-terc'butiloxikarbonil^L-lizil-L-valil-L-tirozil-L-prolin-terc.butilészter-trihidrokloridot 5 ml 90%-os piridinben 1 óra hosszat keverünk 50° hőmérsékleten, majd 175 mg (Ó,l85. millimól) ditíklofaexil-karbodiimidet adunk hozzá, majd 5 óra múlva még egyszer ugyianennyi dieiklohexil-karbodi-1 imidet. Az elegyet 24 óra hosszat hagyjuk 50° hőmérsékleten reagálni, majd a levált 161 mg diciklóhexilikiarbamidot kiszűrjük és a nyers reafccióterméket (1,77 g) nagymennyiségű etilacetát hozzáadásával kicsapjuk. A kapott hidrokloridot egy acetát-alakban levő Amberlite IR-áB ioncserélő-gyantával töltött, 16 mm átmérőjű, 27 >cm magas oszlopon átvezetve triacetáttá alakítjuk át. Tisztítás céljából a, kapott védett tetrakozapeptídészter teljes mennyiségét 50% tere.butanolban egy karboximetiloellulózzal töltött, 16 mm átmérőjű, 17 cm magas oszlopon visszük; át és növekvő koncentrációjú 2 n ecetsavat tartalmazó 50%-os tercbutanollal kromatografáljuk. A ^kiselejtezésre kerülő szélső frakciók mellett 50%-os tere.butanol és 2 n ecetsav 96:4 arányú elegyévei eluáljuk a tiszta védett tetrakozapeptidesz' tért. Hozam 740 mg. Ez a frakció, a „101" oldószer-rendszerrel kapott vékonyrétegű kromatogramon Paul-, Remdel—Hoppe- vagy ninhidrinreagenssei csupán egyetlen foltot mutat; Rf = 0,6. Ibolyántúli színkép 0,1 n nátronlúggal metanolban: 2-max = 2S3 millimikron (e = 8000) /.,„„ = 289 millimikron (e = 8300) 8 l^y 7. D-szeril-D-tirozil-L-szeril-L-metionil-L-glutamil-L-hisztidil-L-fenilalanil-Loarginil-L-triptofanil-glicil-L-lizil-L-prolil-L-10 -valil-glicil-L-lizil-L-lizil-L-arginil-L-arginil-L-prolil-L-valil-L-lizil-L-valü-L-tirozil-prolin-hexaacetát 500 mg védett tetrakozapeptid-terc.butilész-15 tért 5,5 ml 90%-os trifluorecetsavval szobaihőfokon 30 percig kezelve hasításnak vetünk alá. A trifluoraeetátot nagymennyiségű peroxidmenntes éter hozzáadásával kicsapjuk, leszűrjük, majd sok éterrel, végül pedig petroléter-20 rel mossuk. A kapott amorf terméket vízben oldjuk és a trifluoraeetátot acetát-<alakban levő „Merck III" ioncserélő-oszlopon acetáttá alakítjuk át. Hozam 450 mg vékonyrétegű kromatográfiai vizsgálattal tisztának mutatkozó tetra-25 kozapeptid-D1' 2 -béta , " 24 -kortikotropin-hexaacetát. Rfioi = 0,5 (alumíniumoxidon). Ibolyántúli színkép 0,1 n nátronlúgban: ~l max = 283 millimikron; i(£ =8300) 30 *max = 28© millimikron (£ = 8600). Ez a peptid leucinaminopeptidáz: enzimmel nem hasítható. iSaffran-próbában jó adrenokortikotrop hatást mutat. í5 3. példa: Száraz-ampullában az alábbi alkotórészekből 'álló készítményt állítjuk elő: 40 Di^-béta^s^-kortikotropin-hexaaicetát 0,5. mg ZnS04 -7 H 2 0. 1,2»-mg Na3 PO/,-12 H2O 1,38 mg mannit 40,0 mg 45 Felhasználás előtt a száraz^ampulla tartalmát egy külön oldószerampullában kiszerelt 1. ml desztillált vízzel elegyítjük. nymodon 7,6 pH-értékű szuszpenziót kapunk. 50 4. példa: Szárazampullában, az alábbi -összetételű készítményt állítjuk elő: ' 55 D1 ' 2 -i béta 1_24 -kortikO'tropin-hexaacetát 0,5 mg ZnS04 -7 H 2 0 1,23 mg mannit 40,0 mg és egy oldószerampullába az alábbi összetételű oldatot visszük be: 60 Na3 PÖ 4 -12 H 2 0 1,38 mg „Versene — Fe-3" 0,1 mg desztillált vízzel feltöltve 1,0 ml-re. Felhasználás előtt a szárazampulla és az olfi5 datot tartalmazó ampulla tartalmát elegyítjük í)
