153665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására

a; til-, formil-, trifluoraeetil-, ftalil- vagy karbobenzoxi-védőcsoport vagy valamely színes védőcsaport, pL p-fenilazo-benziltoarbonil-csoport vagy p^(p'-metoxi-f enil-azo)-benziloxikarbonil-esoport rávitele útján védhető; különösen előnyös ilyen célra a terc.butiloxikarbonil-csoport alkalmazása. Az arginin guanidino-csoportjában levő aminoesoportnak a védelmére nitrioesoport alkalmazható; az argininnak ezeket az aminocsoportjait azonban nem feltétlenül szükséges a reakció folyamán védeni. A hisztidin iminocsaportját benzil- vagy tritilgyök bevitele útján védhetjük. A védett amino- vagy iminocsoportnak a megfelelő szabad csoporttá, valamint a funkcionálisan módosított karboxilcsoportnak sza* bad karboxilcsoporttá való alakítása az eljárás során önmagutóban ismert módszerekkel, pl. hidrolizáló vagy redukáló szerekkel való kezelés útján történhet. A találmány szerinti el járás egy előnyös kiviteli' módja értelmiében úgy járhatunk el, hogy az első három aminosavat tartalmazó tripeptidet (pl. H-D-Ser^D-Tyr-Ser-OH, ahol a rövidített írásmód mindig L-aminosavakat jelent, amennyiben a D külön nincsen kitéve) vagy az ezeken kívül még a 4. aminosavat is tartalmazó tetrapeptidet a következő aminosavakból álló heptapeptiddel ill. hexapeptiddel, előnyösen az azid-módszer alkalmazásával a megfelelő dekapeptiddé kondenzáljuk, majd ezt a dekapeptidet kapcsoljuk a még hátralevő teljes pepiid-szekvenciával, vagyis a hexadekapeptid előállítása esetén a 11—116. aminosavból álló /hexapeptiddel,. a nonadekapeptid előállítása esetén a 11—'19. aminosavból álló nonapeptiddel, az eikozapeptid előállítása esetén a 11—20. •aminosavból álló dekapeptiddel, a heneikozapeptid előállítása esetén ,a 11—21. aminosavból álló undékapeptiddel, a dofcozapeptid előálilítása esetén a 11—22. aminosavból álló do- dekapeptiddel, a trikozapeptid előállítása esetén a 11—23. aminosavból álló tridekapeptiddel, a tetrafcozapeptid előállítása esetén a- 11—24. "aminosavból álló tetradekapeptiddel, a pentakozapeptid előállítása esetén a 11—25. aminosavból .álló pentadekapeptiddel, az oktakozapeptid előállítása esetén w 11—28. aminosavból álló oktadekapeptiddel, a nonatriakontapeptid előállítása esetén a 11—39. aminosavat tartalmazó nonakozapeptiddel, vagy a természetes ACTH-szekvenciához viszonyítva az egyes aminosav-elemek tekintetében módosított szerkezetű megfelelő peptidekkel. E kondenzáció során kapcsolási módszerként előnyösen a karbodiimid-módszer, vagy pedig az aktivált észter, különösen p-nitrofenilészter alkalmazásán alapuló módszer alkalmazható. Ez utóbbi esetben a dekapeptid p-nitrofenilészterét nem. szükséges elkülöníteni ilyen alakban, hanem ez az észter közvetlenül a kondenzációs lépésben képezhető a szabad karboxilcsoportot tartalmazó dekapeptidből p-nitrofenol és diciklohexilkarbodiimid segítségével. A dekapeptid tehát az alfaHaminocsoporton védett, de szabad karb'3865 6 oxilcsoportot tartalmiazó alakban vagy p-nitror fenüészter alakjában alkalmazható. A dekapeptid alfa-aminocsoportját előnyösen terabutüoxikarbonil-csoporttal védhetjük. A dekapep-5 tiddel kondenzálandó peptid-töredékben a láncvégi karboxilcsoport előnyösen tere.butilésztervagy amid-^csoport alakjában lehet- jelen. A kondenzálandó peptid-töredékben jelenlevő oldallánc-aminocsoportoikiat előnyösen terc.butillü oxikarbonil-c^oporttal, az oldalláncban levő karboxilcsoportokat pedig terc.butilészter-csQr portofc alakjában védhetjük. Az ilyen védőcsor portofcat az utolsó reakciólépésben trifluorecetsav segítségével hasíthatjuk le. 15 A találmány szerinti eljárás egy másik előnyös kiviteli alakja esetében az első négy aminocsoportot tartalmazó tetrapeptidet (pl. H-D-Ser-D-Tyr-iD-Ser-D-Met-OH) az egész hátralevő peptid-szekvenciával, tehát a nonadeka-20 peptid előállítása esetén az 5—19. aminosavakat tartalmazó pentadekapeptiddel, az eikozapeptid előállítása esetén az 5—20. aminosavakat tartalmazó hexadekapeptiddel, a heneikozapeptid előállítása esetén az 5'—21. aminosava-25 kat tartalmazó hepta dekapeptiddel, a dokozapeptid előállítása esetén az 5—22. aminosavakat tartalmazó oktadekapeptiddel, a trikozapeptid előállítása esetén az 5—23. aminosavakat tartalmazó nonadekapeptiddel, a tetrakozapep-80 tid előállítása esetén az 5'—24. aminosavakat tartalmazó eikozapeptiddel, a pentakozapeptid előállítása esetén az 5—25. aminosavakat tartalmazó heneikozapeptiddel stb, ill. a szekvenciájukban az egyes aminosavak tekintetében 35 módosított megfelelő peptidekkel kondenzáljuk. E kondenzáció során kapcsolási módszerként előnyösen az azid-módszert alkalmazzuk. A tetrapeptidhidnazid ill. -^azid alfa-aminocsoportját előnyösen terc.butiloxikarbonil-csoporttal .40. védjük. A tetrapeptiddel kondenzálandó peptid szabad állapotban vagy észterként, különösen terc.butilészterként, vagy pedig omega-tamid .alakjában alkalmazható. E peptidben az oldalláncbeli aminocsoportokat előnyösen tera-45 butiloxikarbonil-csoportfcal, az oldalláncbeli karboxilcsoportokat pedig terc.butilészter-csopoijtokkal védjük. A tetrakozapeptid előállításához szükséges eikozapeptidésztert, amely első aminosavként glutaminsavat tartalmaz, pl. oly-50 módon állíthatjuk elő, hogy karbobenzoxi-(gamma-terc.butil)-L-glutamil-L-hisztidil-L-fénilalanil-L-arginil-L-triptof:anil-glicint az ep-szilon-terc.butiloxikarbonil-L-lizil-iL-prolil-L-valil-glicil-terc.butiloxikarbonil-L-lizil-terc.-bu-55 tiloxikarbonil-L-lizil-L-arginil-!L-arginil-L-prolil-L-valil-terc.butiloxikarbonil-L-lizil-L-valil-L--tirozil-L-prolin-terc.butilészter tetradekapeptidszármazék tritozilátjávai kondenzálunk és a karbobenzoxiesoportiot palládiumios aktívszén és 60 jégecet jelenlétében hidrogenolitikusan lehasítjuk. A peptid-töradékek kondenzációja útján a kapott teljes peptidből (hexadekapeptid, hepta,: dekapeptid stb. egészen nonatriakontapeptidig), 65 amelynek alfa-aminoesoportja és oldalláncbeli