153664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
17 153664 18 hidrogénfelvétel befejeződése után a, katalizátort leszivatással kiszűrjük és a szüredéket vákuumban szárazra pároljuk: be. Ilymódon 530 mg acetátot .(az elméleti hozam 06%-a ) kapunk. A vegyület vékonyrétegű kromatografálás során egységes anyagnak mutatkozik; R/ 102 = 0,08. 2. Hidroklorid: 300 mg a) alatti módon kapott nonapeptíd-acetátot 5 ml piridin és 200 mg piridin-hidroklorid hozzáadásával oldatba viszünk. Az oldatot szárazra pároljuk be és a maradékot a piridinacetát eltávolítása céljából 40° hőmérsékleten nagyvákuumban több óra hosszat szárítjuk. A maradékot a piridin-hidroklorid eltávolítása céljából aicetonnal eldörzsöljük, amikoris a nonapeptid4ndrokloridot acetonban oldhatatlan poralakú termék: alakjában kapjuk. f) BOC-D-Ser-Tyr-Set-Met-Glu(OtBu)-His~Phe-Arg-Try-Gly-Lys<BQC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-OtBu 100 mg fenti módon kiapott nonapeptidészter-hidrokloridot 2,2 ml absz. piridinben 120 mg BOC-D-Ser-Tyr-iSer-Met-(Glu:(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH-val .(vö. 1. példa) reagáltatunk. A reakcióelegyet nitrogén-légkörben addig keverjük, míg teljes oldódás nem következik be. Ezután 100 mg didklahexü-karbodiimidet adunk hozzá és nitrogén légkörben, 24° hőmérsékleten további 18 óra hosszat keverjük. A képződött csapadékot kiszűrjük és a szüredéket szárazra pároljuk be. A bepárlási maradékot éterrel eldörzsöljük és a kapott szilárd poralakú terméket Craig szerint 120 fokozatú ellenáramú megosztásnak vetjük alá kloroform-széntetraklorid (5:2) — metanol — 0,5 mólos vizes ammóniumaeetátoldat (2:1) alkotórészekből álló 1:1 arányú rendszerben, 3 ml fázis-térfogattal. A kapott nyers terméket 15 ml alsó- és felső-fázisban oldjuk és az oldatot a megosztókészülék első 5 csövébe szétosztjuk. A 451—55. frakciók tartalmazzák a tiszta, védett nonadekapeptidésztert ((megoszlási szám K = 0,7). Ez a termék szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálás során egységes, anyagnak mutatkozik; R/ 110 — 0,42. g) H-D-Ser-Tyr-SernMet-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly^Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-OH hexaacetát 50 mg fenti módon kapott védett nonadekapeptidésztert 3 ml 95%-os trifluorecetsavban oldunk és az oldatot 1 óra hosszat hagyjuk állni 22° hőmérsékleten. Ezután szárazra pároljuk be az oldatot, a maradékot 2 n ecetsavban oldjuk ós a trifluoracetát-ionok eltávolítása céljából egy gyengén bázisos ioncserélő-oszlopon (Merck Nr. II acetátalakban) szűrjük keresztül. Az eluátumot liofilizáljuk; ilymódon 40 mg szabad nonadekapeptidet kapunk szinte^ len amorf por alakjában. Ez a termék papír-eléktroforézissel vizsgálva 5 <pH = 6,3, 1000 V, 2 óra futtatási idővel) egységes anyagnak mutatkozik; ugyanígy egységesnek bizonyul a termék alumlniumoxid-lemezen végzett vékonyrétegű kromatografálás esetén is, amikoris a 101-rendszerben 0,50 R/-10 értéket kapunk. A termék erős kortikotrop hatást mutat; a Sayers-próba szerint a D-SerMjéta'-^-kortikotropin hatása számottevően nagyobb, mint a csupa L-aminosavat tartalmazó ibéta1-19 -korti-15 kotropiné. 4. példa: ' 20 a) Z-Pro-Val-Ly.s((BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 1. 5,14 g i(6,75 mmol) H-Val-Lys(BOC)-Val_Tyr-Pro-OtBu pentapeptidésztert — amelyet pl. a 84 475 sz. francia pótszabadalmunkban 25 leírt módon állíthatunk elő — 10 ml dimetilformamidban oldunk és az oldathoz 3,01 g (8,15 millimól) benziloxikarbanil-L-prolin-pHnitrofenilésztert adunk. 20 óra hosszat szobahőfokon hagyjuk a reakcióelegyet állni,, majd 100 ml 30 etilacetáttal hígítjuk az oldatot és 50 ml vízzel egyszer, 2:5i—125 ml 1 mólos káliumkarbonátoldattal négyszer, azután 25—25 ml vízzel kétszer mossuk. Az etilacetátos fázist ezután 0° hőmérsékletre hűtjük le és ,1%-os vizes citrom-35 savoldattal (.2 X 25 ml) extraháljuk1, semlegesre mossuk és vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk. A védett hexapeptidésztert a tömény oldat száraz eülészterrel való hígítása útján poralakú 40 termékként kapjuk, 97%-os termelési hányaddal. A termék szilikagélen történő vékonyré^ tegű krornatograf álással egységes anyagnak mutatkozik az alábbi oldószer-rendszerekben: 45 metanol R/ = 0,97 kloroform-metanol (9ö:6) R/ = 0,26 benzol-aceton (1:1) R/ = 0,47. A termék nem kristályos; olvadáspontja kb. 50 156—180°; [<*]21 D = 94,5 (c = 1,08 metanolban); [«]23 D = —46,4 (c = 1,0)1 dimetilformamidban). 2. 7,61 g )(10 millimól) H-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro^OtBu szabad pentapeptidésztert 15 ml 55 dimetüformamidban oldunk és 1,4 ml trietilamint adunk az oldathoz. Az elegyet —10° hőmérsékletre hűtjük le, majd 4,73 g (12 millimól) karbobenziloxi-L-prolin-wN-nhidroxi-ftáiimidésztert — előállítva Rec. Chim. Trav. 60 Pays-Bas 81, 683 (1962) szerint — adunk hozzá. A reakcióelegy rövid idő alatt sötétvörösre színeződik; teljes oldódás; után dolgozzuk fel tovább. Az észter oldása és a kapcsolás mindössze 15. percet vesz igénybe. A reakcióelegy 65 feldolgozása olymódon történik, bogy etilace-9
