153664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
153664 13 14 raháljuk. Az etilacetátos fázisokat egyesítjük, telített vizes nátriumklosridoldattal mossuk, vízmentes nátriumszulfátan szárítjuk és az: oldószert csökkentett nyomás alatt elpárologtatjuk. Ilytnódon 4,5 g BOC-iD-alanint kapunk, amely 83—84°-on olvad; M22 D = +25 ±0,3° (c = 2,65 metanolban). A termék szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálás során az alábbi R/-értékeket mutatja: R/ 43C = 0,35, R/.IO'I = 0j75. b) BOC-D^Ala-Tyr-Ser-MetJOCH3 3 g (7,2 millimól) H-Tyr-Ser-Met-OCH;, 2,7 ml dimetilformamid és 50 ml acetonitril elegyével készített oldatához 1,37 g 1(7,2 millimól) BOC-D-alanint adunk, majd az elegyet —5° hőmérsékletre hűtjük le és 1,65 g Í(7,S millimól) diciktóhexilkarbodiimidet adunk hozzá. A reakcióelegyet —5° hőmérsékleten 2 óra hoszszat, majd 0° hőmérsékleten 13 óra hosszat keverjük. A diciklohexilkarbamid mellett a BQC-tetrapeptidészter is kiválik a reakcióelegyből. A csapadékot leszűrjük és még nedvesen háromszor eldörzsöljük 7,5—7,5' ml meleg dimetilformarniddal, az oldószert nagyvákuumban elpárologtatjuk: és a maradékot metanolból kristályosítjuk. Ilymódon 2,01 g védett tetrapeptid-metilésztert kapunk, amely 186—187°-on .alvad; [af2 D = —2 ±1° (c = 1,05 metanolban). Ez a vegyület szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálás során az alábbi R/-értékeket mutatja: R/ 43C = 0,7 R/ (kloroform-metanol 9:1) = 0,4. A vegyület Javelle1 —Riendel—Hoppe-reagenssel, Pauly-reagenssel és káliumjódplatináttal pozitív reakciót ad. c) BO€-DHAla-Tyr-Ser^Met-NH-NH2 1,7 g (2,9 millimól) BOC-tetrapeptidésztert 12 ml metanolban foirrón oldunk, az oldatot szobahofokra hűtjük le, majd 0,73 ml hidrazinhidrátot adunk hozzá és 16 óra hosszat keverjük szobahőfokon. Ennek során a hidrazid sűrű fehér csapadék alakjában kiválik. 12 ml vízzel történő hígítás után az elegyet még 1 óra hosszat keverjük, majd . jégfürdőben lehűtjük és a .részben kristályos csapadékot szűréssel elkülönítjük, vízzel alaposan mossuk, majd nagyvákuumban foszforpentoxid és kénsav felett megszárítjuk. Ilymódon 1,42 g védett tetrapeptid-hidrazidot kapunk, amely 176:—177° -on olvad; [«]22D = +16 ±1° (c = 1,03 jégecetben). A vegyület szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálás során az alábbi R/-értékeket mutatja: 10 35 R/ 100 = 0,65 R/ (kloroform-metanol 9:1)= 0,2. A vegyület Javelle—Reindel—Hoppe-reagenssel, Pauly-reagenssel és kálium jódplatináttal pozitív reakciót ad. d) BOC-©^Ala~Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH A dekapeptid-származékot az 1. példa d) pontjában leírthoz hasonló módon állítjuk.elő 1,32 g BOC-D-Ala-Tyr-Ser-Met-hidrazidból és 1,61 g H-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH-15 ból. Ilymódon 1,9 g nyers BOC-dekapeptidet kapunk. 90%-os metanolból történő kristályosítás után 700 mg kristályos peptidszármazékot kapunk, amely 206°-on bomlás közben olvad, 20 emellett 720 mg nem oldódó amorf, 2T0°-on olvadó terméket, A szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálás során >(5i2 és 101 rendszerrel) mindkét frakció tisztának és egymással azonosnak mutatkozik. Az alábbi R/-ér-25 tekéket • kapj uk: R/ 101 = 0,715 R/ 52 = 0,2l5. [°] 22„ —8 ±1° <c = 1,06 50%-os piridinben). e) BOC-D-Ala-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly^Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 370 mg (0,25 millimól) BOC-D-Ala-Tyr-Ser-Met-Glu-(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH és 555 mg H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-40 -OtBu elegyét nitrogén-légkörben, 5 ml 80%-os piridinben 1 óra hosszat keverjük 45° hőmérsékleten, majd 80 mg dieiklohexil-karbodiimidet adunk hozzá, 5 óra múlva pedig újabb 80 mg diciklohexftkarfoodiimidet. Az elegyet 20 óra 45 hosszat 'hagyjuk reagálni 45° hőmérsékleten, majd szobahőmérsékletre hűtjük le, a levált diciiklohexilkarbamidot kiszűrjük és a nyers neaJbcióterméket sok etilacetát hozzáadásával lecsapjuk. Ilymódon 880 mg nyers, még reagá-50 latlan kiindulóanyaggal szennyezett, védett tetrakozapeptidésztert kapunk. A terméket Craig .szerint ellenáramú megosztással tisztítjuk, klorofomi-széntetraklorid-metanol-puffer 5:2:8:4 rendszerben 550 fokozatban; pufferként 55 28,5 ml jégeoet és 19,25 g nátriumacetát 1 liter vízzel képezett oldatát alkalmazzuk. A 619—60. fokozatból 400 mg tiszta D-AAla1 béta1_24 -kortikotropin-terc.butilésztert kapunk; ![ ű; ]22 D = _48 +2° (c = 0,52 metanolban). 60 Ez a termék az ibolyántúli színképen {0,1 n metanolos nátriumhidroxidoldatban) az alábbi maximumokat mutatja: 1 == 283 mülimikron (e = 9300) 65 1 = 289 millimikron <(e = 9600). 7
