153664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására

153664 6 aminocsoportot /(és védettj kaíboxilcsoportot) tartalmazó aminosavval ill. pepiiddel, pl. valamely foszfitamiddal reagáltatunk. A reakcióban részt nem vevő szabad funkcionális csoportokat célszerűen védjük, különösen hidrolízis vagy redukció útján könnyen lehasítható csoportokkal; a karboxilcsoportot előnyösen észterezés, pl. metanollal, tere.butanollal, benzilalkohollal vagy p-nitrobenzilalkohollal való észterezés, vagy pedig amidképzés útján védjük, az aminoicsoportok védelmére pedig tozil-, tritil-, formil-, trifluoraeetü-, ftalilvagy karbobenzoxi-csoportokat, vagy pedig színes védőcsoportokat, mint p-fenilazo-benziloxikarbonil-csopoirtot vagy pM(p'-metoxi-fenilazo)-benziloxikaríbonil-csoportot, különösen pedig terc.butiloxikairbonil-csoportot alkalmazhatunk. Az arginin guanido-csoportjában lev: aminocsoport védelmére a nitrocsoport alkalmas; az argininnak ezt az: említett aminoesoportját azonban nem feltétlenül szükséges a reakció során védeni. A hisztidin iminoicsoportja benzil- vagy tritilcsoport segítségével védhető. A védett amino- vagy iminoesoport szabad • csoporttá való átalakítása, valamint a funkcionálisan megváltoztatott karhoxilcsoportnak a megfelelő szabad karboxilcsoporttá való átalakítása az eljárás során önmagukban ismert módszerek szerint, pl. hidrolizáló vagy redukáló hatású szerekkel való kezelés útján történhet. Az eljárás egy előnyös kiviteli imádja esetében olymódon járhatunk el, hogy az első hár rom aminosavat tartalmazó tripeptidet (pl. H-D-Ser-Tyr-Ser-OH, a rövidített írásmód mindenkor L-aminosavakra vonatkozik, ha a D-nincs külön kitéve), vagy az .ezeken kívül a negyedik aminosavat is tartalmazó tetrapeptidet a következő aminosavakból álló heptapeptiddel ill. hexapeptiddel a 10. aminosavig terjedő szekvenciává kondenzáljuk, előnyösen az azidos módszer alkalmazásával, majd az így kapott dekapeptidet a -teljes további peptidszekvenciával kondenzáljuk, tehát pl. a hexadekapeptid előiállítása esetén a 11—16 aminosavakból álló hexapeptiddel, a monodekapeptid előállítása esetén a 11—19 aminosavakból álló nonapeptiddel, az: eikozapeptid előállítása esetén a 11—120 aminosavakból álló dekapeptiddel, a heneikozapeptid előállítása esetén a 11—211 aminosavakból álló undekapeptiddel, a dokozapeptid előállítása esetén a 11-—.22 aminosavakból álló dodekapeptiddel, a trikozapeptid előállítása esetén a 11—28 aminosavakból álló tridekapeptiddel, a tetrakozapeptid előállítása esetén a 11—24 aminosavakból álló tetradekapeptiddel, a pentakozapeptid előállítása esetén a 11—25 aminosavakból álló pentadekapeptiddel, az oktakozapeptid előállítása esetén a 11—28 aminosavakból álló oktadekapeptiddel, a nonatriakontapeptid előállítása esetén a 11—39 aminosavakból álló nonakozapeptiddel ill. a természetes ACTH-szekvenciához képest egyes aminosav-csoportokban módosított szerkezetű megfelelő peptidekkel folytatjuk le a kondenzációt. Az: ilyen kondenzáció esetén kapcsolási müdszerként előnyösen a karbodiimides módszert vagy az aktivált észterek, különösen a p-nitroifenilészter .alkalmazásán alapuló 5 módszert alkalmazzuk. Ez utóbbi esetben a dekapeptid p-nitrofenilészterét nem szükséges ebben az alakban elkülöníteni, hanem ezt magának a kondenzációs reakciónak a során képezhetjük a szabad karfooxilcsoportot tartal-10 mázó dekapeptidből p-nitrofenollal és diciklohexilkarbodiimiddel. A dekapeptid tehát szabad karboxilicsoportot vagy p-nitrofénilészter-csoportot tartalmazó, alfa-aminocsoportjában védett pepiidként kerül alkalmazásra. A dekapep-IS tid alfa-aminocsoportját előnyösen tercbutiloxikarbonil-csoporttal védhetjük. Abban a peptid-töredékben, amelyet a dekapeptiddel kondenzálunk, a terminális karboxílcsoport előnyösen terc.'butilészter-csoportot vagy amidcsoport 20 alakjában lehet jelen. A kondenzálandó peptidtöredékekben jelenlevő oldallánc-aminocsoportokat előnyösen terc.butiloxikarbonil-csoportokkal, az oldalláne-karboxilcsoportokat pedig terc.butilésztercsoportokkal védhetjük. Az em-25 lített védőcsoportokat az eljárás utolsó lépésében trifluorecetsawal hasíthatjuk le. A találmány szerinti eljárás egy másik: előnyös kiviteli alakja esetében az első négy aminocsoportot tartalmazó tetrapeptid, elsősor-30 ban a H-D-Ser-Tyr-Ser-Met-OH, az egész további peptidszekvenciával kerül kondenzálásra, tehát a monadekapeptid előállítása esetén az 5—19 aminosavakat tartalmazó pentadekapeptiddel, az eikozapeptid előállítása esetén az 35 5—20 hexadebapeptiddel, a heneikozapeptid előállítása esetén az 5—21 aminosavakból álló heptadekapeptiddel a dokozapeptid előállítása esetén az 5—22 aminosavakból álló ofctadekapeptiddel, a trikozapeptid előállítása esetén az 40 5—23 aminosavakból álló nonadekapeptiddel, a tetrakozapeptid előállítása esetén az 5—24 aminosavakból álló eikozapeptiddel, a pentakozapeptid előállítása esetén az 5'—-25 aminosavakból álló heneikozapeptiddel stb., ill. a 45 természetes ACTH-szekvenciában szereplő egyes aminosavak kicserélése útján módosított megfelelő peptidekkel folytatjuk le a kondenzációt. Ezt a kondenzációt is előnyösen az azidos módszer kapcsolási módszerként való alkalmazásá-50 val lehet lefolytatni. A tetrapeptidhidrazid ill. -azid alfa-aminocsoportját előnyösen terc.butiloxikarbonilcsoporttal védjük. A tetrapeptiddel kondenzálandó peptid szabad peptid vagy észter, különösen terc.hutilészter, vagy pedig 55 omega-amid alakjában alkalmazható. Ebben a peptidben az: oldalláne-aminocsoportokat előnyösen terc.butiloxikarbonilcsoporttal, az oldallánc kanboxilcsoportokat pedig előnyösen terc.butilésztercsoportokkal védjük. 60 Amikor azután a peptid-töredékek kondenzációja útján előállítottuk a kívánt teljes pepiidet (hexadekaípeptidet, hsptadekapeptidet stb. egészen a nonatriakontapeptidig), amelynek alfa-aminoesoportja és oldallánc-.ammocsoport-65 jai terc.butiloxikarbonilcsoporttal, terminális 3