153299. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tetrapeptidszármazékok előállítására
153299 8 lási maradékot 2000 rész éterrel keverjük, majd leszűrjük. A szilárd maradékot etanolból kristályosítva, ' N-(o-nitrofenilszulf enil)-L-metionil-(/Merc.-butil)-L^asziparagil-L-fenilalanin-ainid©t kapunk 168—169 C°-on olvadó sárga kristályos 5 termék alakjában. _ 310 rész fenti módon kapott terméket 7500 rész forrásban' levő kloroformban oldunk, majd az oldatot gyorsan lehűtjük 15 C° hőmérsékletre. 36-,5 rész száraz hidrogénkloridot tartalmazó io 300 rész étert adunk azután, adagonkánt, 10— 15. C° hőmérsékleten, keverés közben az oldathoz.. Az elegyet 15—20 C° hőmérsékleten 5 percig tovább keverjük, majd leszűrjük. A szilárd maradékot éterrel mossuk, majd 2000 rész hideg 15 etanolban oldjuk. Az oldatot 1 óra hosszat 20 Cc hőmérsékleten tartjuk, majd a levált színtelen szilárd terméket szűréssel elkülönítjük. Ily módon L-metionil-(/>'-terc.butil)-L-aszparagil-L-fenilalanin^aimid-hidrokloridot kapunk, amely 20 202—203 C°-on felhabzás közben olvad. 2. példa: 612 rész tri fluor ecetsav és 100 rész víz elegye- 25 hez 10 C° hőmérsékleten, keverés közben, 174 rész N-(tei,c.butiloxika i rbonil)-L-triptO'fanil-L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalanin-^amidot adunk. A kapott oldatot 1 óra hosszat keverjük 18—20 C° hőmérsékleten, maid 3000 rész étert adunk C0 hozzá. Az elegyet 0 C° hőmérsékletre hűtjük, 10 parcig ezen a hőfokon tartjuk, majd leszűrjük. A szilárd 'terméket éterrel háromszor mossuk, majd 20 mm Hg-oszlop nyomás alatt, 50 C° hőmérsékleten megszárítjuk, Az így kapott L- -35 -triptofaniI-L-metionil-L-^aszpar.agil-L-fienilalanm-amid-trifluóraűetát 185—190 C°-on felhabzás közben olvad. Szilikagél adszorbenssel és 7 rész n->butanolt, 1 rész ecetsavat és 2 rész vizet tartalmazó oldószerrendszerrel végzett vékony- 40 rétegű kramatograifálás során a termék egyetlen foltot adott, amely ninhidriddel hívható elő, R/ = 0,61. A • fenti eljárás során kiindulóanyagként felhasználásra kerülő N-(terc.bütiloxikairbonil)-L- 45 -tiriptofani'1-L-metdoinil-L-iaiszparagil-L-íenilalanin-aniid az alábbi módszerek bármelyike szerint előállítható: a) 218 rész N-ítercbutiloxilkarbonilJ-L-triptefán^^^-triklórfienilészter, 185 rész L-metionil- - 50 -L-aszparagU-L-feniMlanin-amid, 45,6 rész trimetilamin, 4000 rész dimetilfoiroaimid és 500 rész víz elegyét 48 óra hosszat keverjük 0 C° hőmérsékleten, majd a keverést 20—25 C°-on további 24 óra hosszat folytatjuk. Az elegy pH- 55 értéklét ezután 2 n. sósavoldat 0 C° hőmérsékleten történő óvatos hozzáadásával 2-re állítjuk . be, majd keverés köziben 1.5 000 rész jeges vizet adunk hozzá. A kapott szilárd terméket szűréssel elkülönítjük, vízzel. mossuk és 80Ó0 rész 60 , forrástan levő etanol hozzáadásával enyhén hevítjük. Ezután lehűtjük az elegyet és szűrjük, a kapott szilárd maradékot etanollal mossuk és csökkentett nyomás alatt, 40—50 C° hőmérsékleten megszárítjuk, Ily módon N-(terc.butáloxi- 6 5 kai<bünil)-L-triptofanil-L-tmetionil-L-aszparagil-L-ísnilalanin-^amidot kapunk, amely 209—210 C°-on felhabzás közben olvad. A L-metionil-L-aszparagil-L-fenilalanin-aniid, amely 223—225 C°-on bomlás közben olvad, ismert módszerekkel állítható élő. b) 225 rész N-terc.butiloxikarbonil-L-triptofanil-L-metionin-hidrazidot 500 rész száraz tetrahidrofuránban szuszpendálunk és a szuszpen- • ziót —20 C° hőmérsékletre hűtjük, majd 36,5 rész száraz hidrogénkloridot is tartalmazó 500 rész száraz tetrahidrofuránt adunk hozzá —20 C° és —25 C° közötti hőmérsékleten, élénk keverés közben. Az így kapott oldatot azután 61 rész n-butilnitrittel kezeljük és a keverést —20 C° és —25 C° közötti hőmérsékleten további 6 percig folytatjuk. Az így keletkezett halványzöld színű 'oldatot hozzáadjuk 140 rész L-aszparagil-L-fenilalanin-iamid 2000 rész dimetilfoirmamid, 100 rész víz és 151,5 rész trietilamin elegyével készített oldatához. 0 C° hőmérsékleten. A reakcióelegyet ugyanezen a hőfokon 2 napig állni hagyjuk, majd 10 000 rész jeges vizet adunk hozzá. Ezután leszűrjük .az elegyet és a kapott szilárd terméket vízzel mossuk, majd etanolból átkristályosítjuk. Az így kapott N-(terc.butiloxikarbonil)-L-itriptofanil~L-m€tionil-i -L-aszparagil-L-fenilalanin-amid 209—210 C°-on felhabzás közben olvad. A kiindulóanyagként felhasználásra kerülő N-(terc.butiloxikarbonil)-L-triptofanil-L-nietionin-hídrazid az alábbi módon állítható elő: 200 rész L^metionin-metilészter-hidrokloridot 1500 rész kloroformban szuszpen dalunk és e szüszpenzi ólhoz 0 C'° hőmérsékleten, keverés közben, 101 rész trietilamint adunk. A keverést 0 C°-on mindaddig folytatjuk, míg a szilárd anyag teljesen fel nem oldódott, azután 304 rész N-j(te:rC.butiloxikarbonil)-L-triptofánt, majd 206 rész NyN'-dÍ!CÍklohexil4íarbodiiniidet adunk hozzá 0—5 C°. hőmérsékleten. A reakcióelegyet 18 óra hosszat 0 C°-on tartjuk, majd leszűrjük. A szüredéket előbb 10%-ös vizes nátriumkloridöldat, majd 10%-os vizes citromsavoldat, ismét 10%-os vizes nátriumkloridoldat, azután n-káliumihídirogénkarbonlátoldat, végül pedig háromszor 10%-os vizes nátriumkloridoldat 200—200 résznyi mennyiségiéivel mossuk, A szerves oldószeres fázist azután vízimentés magnéziumszulfiáton szárítjuk és csökkentett nyomás alatt bepároljuk. A^manadléfcot 800 rész diizoipropiléterlben oldjuk és az oldatot 1 óra hosszat állni hagyjuk 0 C° hőmérsékleten. A képződött kristályokat szűréssel elkülönítjük és csökkentett nyomás alatt, 40 C° hőmérsékleten megszárítjuk. Ily módion színtelen tűkristályólk alakjában kapjuk az N->(terc.butiloxikairbonil)-L-triptofanil-L-metionin^metilésztert, amely 98— 99. C°-on olvad. 225 rész fenti észtert 500 rész metanolban oldunk^ Az oldatolt 0 C° hőmérsékletre hűtjük le, majd 55 rész 100%-os hidirazinhidrátot adunk hozzá. A reakcióelegyet 201 —22 C° hőmérsékleten 16 óra hosszat állni hagyjuk, majd leszűrjük, A szilárd maradékot metanollal mossuk és csökken tett nyomás alatt, 40 Cc hő-4
