153200. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vinblasztin és leurozin kinyerésére

r -* 153200 >afálás, majd formamiddal telített benzol és éter 9 :1 arányú elegyével való eluálás útján közvetlenül, szelektíven nyerjük a kristályosítható tisztaságú, VLB és VLR tartalmú frakciókat. 5 A találmány érteimében tehát a vinblasztint és a leurozint oly módon nyerjük ki a rózsameténg (Vinca rosea L., ill. CMharanthus roseus G. Don) szárított részeiből, hogy a szárított drogot vizes ammóniumhidroxid-oldattal 10 előkezeljük., majd toluollal extraháljuk, a besűrített toluolos kivonatot vizes sósavoldattal kirázzuk, azi elkülönített sósavas oldatot 8,5— 9,5 pH-értékre lúgosítjúk és az alkaloidokat diklóretánba átoldjuk, majd a diklóretános ol- 15 dat bepárlása útján kinyert nyers alkaloidelegyet alumíniumóxidon kromatograf ál juk, a formamiddal telített benzol és éter 9 :1 arányú elegyével eluált vinblasztin- és leurozintartalmú frakciókat elkülönítjük és a kinyert alkaloidot 20 frakciónáltan kristályosítjuk, amikor is először a leurozint, azután a vinblasztint — ez utóbbit szulfátalakban — kristályosítjuk ki, alkoholos oldatból. A drog toluolos kivonatának extrahálásiára 25 híg, célszerűen 2%-os sósavat alkalmazunk; a sósavas oldatot előnyösen ammóniumhidroxidoldattal lúgosítjúk meg. A kromatografálás céljaira előnyösen semleges, III—IV aktivitású alumíniumoxid használható. 30 Az eljárás további részleteit az alábbi példa szemlélteti: A rózsameténg {Vinca rosea L. vagy Catharanthus roseus G. Don) megszárított földfeletti , részeiből — szárból, levélből és virágból — álló ES drogot megőröljük. ' 2 kg növényi őrleményt 1 liter 12%-os vizes ammóniumhidroxid oldattal átgyúrunk. A kapott gyurmát kivonjuk 1X10, 3X8 liter technikai toluollal. A megszűrt és. egyesített kivo- 40 natokat csökkéntett nyomás alatt kfo 4 literig besűrítjük. A sűrítményből az alkaloidokat átoldjuk 4X 0,8 liter 2%-os sósavba. A kb. 3,2 liter vizessavas oldatot kirázzuk 0,3 liter gyógybenzinnel 45 a szennyezések és a toluolnyomok eltávolítása céljából. A megszűrt vizes-savas oldatot vizes ammóniumhidroxid oldattal pH = 9-ig lúgosít- , juk. Az alkaloidokat kárázjás útján átoldjuk 3X1 liter diklóretánba, a nyert kb. 3 liter 50 szerves oldatot vízmentes hamuzsirral vízmentesítjük. A vízmentes oldatot csökkentett nyomás alatt szárazra pároljuk. Kinyerünk 8—9 g nyers terméket, mely a VLB-t és más alkaloidokalt tartalmazza. A nyers terméket, 3—4- 55: szeres benzolban oldjuk és a megszűrt oldatot harmincszoros mennyiségű, III—IV' aktivitású, neutrális alumíniumoxidból formamiddal telitett benzol-éter 9 :1 arányú elegyével kialakított kromatograf áló oszlopra öntjük., Az eluálást eo azonos oldószereleggyel végezzük. 200 ml-es frakciókat gyűjtünk és papírkromatográfiás, ül. rétegkromatográfiás ellenőrzés alapján a VLB-tartalmú frakciókat egyesítjük. A VLB 4500— 5000 ml eluátum lecsurgása után jelenik meg és 3000—3500 ml oldószerrel teljesen leoldódik. A VLB-tartalmú frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomás alatt szárazra pároljuk. 0,5—0,6 g VLB-t és VLR-t tartalmazó nyers terméket kapunk, melyet öt-hatszoros mennyiségű analitikai tisztaságú metanolban, 40—50 C° hőmérsékleten oldunk. A metanolos oldatot 24—48 órára jégszekrénybe állítjuk a VLR kristályosítása céljából. Ezután a nyers VLR-t kiszűrjük és a VLB-t tartalmazó anyalúgot szárazra pároljuk. A szárazmaradékot 4%-os vizes kénsavval oldatba visszük ügy, hogy a ke<létkezett oldat pH-ja 3,5'—4,0 között legyen. Az oldatot csökkentett nyomás alatt szárazra pároljuk vagy liofilizáljuk. Az így nyert amorf VLB-szifflíátot kétszeres mennyiségű, analitikai tisztaságú metanolban oldjuk, az oldalihoz hozzáadunk háromszoros mennyiségű, analitikái tisztaságú etanolt. Az elegyet csökkentett nyomás alatt 1/4 térfogatra sűrítjük s az előbbivel azonos mennyiségű absz. etanollal újból hígítjuk. A besűrítést és az etanolos hígítást megismételhetjük kristályosodás megindulásáig. Az elegyet szobahőmérsékleten állni hagyjuk 16 órán át a VLB-szulfát kristályosodása céljából. A kivált VLB-szulfátot szűrjük és szárítjuk, majd átkristályosítás útján tisztítjuk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás vinblasztin és leurozin kinyerésére a rózsameténg szárított részeiből, azzal, jellemezve, hogy a szárított drogot vizes ammóniumhidroxid-oldattal előkezeljük, majd toluollal extraháljuk, a besűrített toluolos. kivonatot vizes sósavoldattal kirázzuk, az elkülönített sósavas oldatot 8,5—9,5 pH-értékre lúgosítjúk, az így felszabadított alkaloidokat diklóretánba átoldjuk, a diklóretános oldatból kinyert nyers alkaloidelegyet alumíniumoxidon kromatograf ál juk és a formamiddal telitett benzol és éter elegyével elüált vinblasztin-- és leurozintartalmú frakcióból e két alkaloid elegyét önmagában ismert módon kinyerjük és az alkaloidokat 'kristályosítással szétválasztjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a vizes-sósavas kivonat meglúgosítását ammóniumhidroxiddal végezzük pH =• 8,5—9,5-re. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a kromatograf álást semleges, III—IV aktivitású alumíniumóxidon végezzük és a vinblasztin- és leurozintartalmú frakciókat formamiddal teli tett benzol és éter 9 :1 elegyével eluáljuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 6609311. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V„ Balassi Bálint utca 21—23.