153140. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptidek kivonására állati szervekből
3 A nyers kivonat továfabtiisztítása oélszerűen adszorpcióval, ilL ioncserélős megkötéssel történik az ianyag ibekonoentrálása végett. A találmány célja olyan eljárás biztosítása, amely kiiküszöböli az ismert eljárások hátra- 5 nyait, és lehetővé teszi olyan nyers kivonat nyerését a különböző állati szervekből, amely megfelelő mennyiségiben és tisztaságban tartalmazza a ikallikreinirihibitor és tripszim-inhibitor hatású polipeptideket. ^ 10 A találmány azon a feBsonaerésen alapszik, hogy a különböző állati szervekből a kallikreininhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptidek savas extrakciója esetén az extralhálás után nyert elegyben bizonyos nehezen oldható sók 15 képzésével egyetlen lépésben el lelhet különíteni az extrahálásra használt sav anionját, a kivonatolt szervmaradékot és az eddigi eljárások esetében szűréssel vagy centrifugálással csak nagy nehézségek árán eltávolítható, finoim eloszlású 20 lebegő szennyezéseket, és így az extrahálás után kapott elegyből egyetlen elválasztási lépéssel tükrös tisztaságú, gyakorlatilag sómentes kivonatot lelhet nyerni. A találmány eljárás a kalükrein-inhibitor és 25 tripszininihibitor hatású polipeptideknek különböző állati szervekből, így tüdőből, májból, pankreászból, parotiszból, lépfoől, veséből való savas kivonására, amely albban áll, hogy a kivonatolandó állati szerveket aprítás után olyan 30 savval vagy savakkal megsavanyított vízzel extralháljuk, amelyből 4,5 és 8,0 közötti pH-tartományban szobahőmérsékleten 10_4 -nél kisebb oldhatósági szorzatú só képezhető, majd az extraktumot olyan fém oxidjával és/vagy hid- 35 roxidjával kezeljük, amelynek kationja az extraihálásra használt savval szobahőmérsékleten 10-4-nél kisebb oldhatósági szorzatú sót képez, majd a kivonatolt szerv és a csapadék elkülönítése után nyert oldatból a kinyerni kívánt po- 40 lipeptidet ismert módon elkülönítjük. A találmány szerinti savak, valamint fém-oxidok és hidroxidok használata egyben az oldat derítését is eredményezi, minthogy a sóképzéssel egyidejűleg a kivonatban levő lebegő, *5 centrifugálással vagy szűréssel el nem távolítható szennyezések is kicsapódnak, és az így nyert csapadék jól ülepszik, az üledék jól centrifugálíható vagy szűrhető. A kapott oldat tükrös tiszta, sótartalma minimális, ioncserélővel 50 vagy oldószeres frakcionálással történő továbbtisztításra. Az eljárás további előnye, hogy ipari méretekben könnyen megvalósítható, a szükséges anyagok nem költségesek, és szemben a szerves oldószeres kivonással, üzemi, körűimé- 55 nyék között sem igényel védőberendezést. A találmány értelmében célszerűen úgy járunk el, hogy 4,5 és 8,0 közötti pH-tartományban szobahőmérsékleten 10~4 -nél kisebb oldhatósági szorzatú sót képező savként oxálsavat, 60 kénsavat és /vagy foszforsavat (használunk. Az extralhálásra használt savval szobahőmérsékleten 10~4 -nél kisebb oldhatósági szorzatú sót képező kationt szolgáltató fém oxidjaként és/ vagy hidroxidjaként kalcium-, bárium- és/vagy 65 4 stroncium-oxidot vagy -hidroxidot célszerű használni. Az extraktumot ezzel a fém-oxiddal és/vagy fém-hidroxiddal kezelhetjük a kivonatolt szerv eltávolítása után is, de célszerű az extraktumot a kivonatolt szerv eltávolítása előtt kezelni ezzel a fémoxiddal és/vagy fémhidroxiddal, és a kivált csapadékot ennek megfelelően a kivonatolt szervekkel együtt elkülöníteni. A kallikrein-inlhibitor aktivitást Werfe—Kaufmann—Boetsch szerint (Hoppe-Seyler's Z. f. physiol. Ohem. 319, 52/1960), a tripszin-inhibitor aktivitását pedig Anson szerint (J. Gen. Pihysiol. 22, 79/1939) mértük. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa. 100 kg darált, fagyasztva tárolt marthatüdőt kevertetünk 300 liter 1%-os. vizes oxálsav-oldattal szolbalhőmérsékleten 2 órán át, majd állandó keverés köziben CaO—víz 1:10 arányban készült szuszpenzióját adagoljuk hozzá a pH ellenőrzése köziben mindaddig, míg az elegy pH-ja 5,5 nem lesz, Ezután a szervmaradékot és a csapadékot dobcentrifugán leoentrifugáljuk. A kapott oldat tükrös tiszta, aktivitása 680 tripszin-inhibitor egység (HE), és 170 000 000 kallikrein-inhibitor egység (KIE). Hamutartalma 0,11%, fehérjetartalma: 6 mg/ml. 2. példa. 1 kg marha-parotiszt 0,5% oxálsavat tartalmazó 2,5 liter vízzel kevertetünk 1 1/2 órán át szobahőmérsékleten, majd telített Bal(OH)2-oldattal keverés közben pH 6,0-ra állítjuk be és centrifugáljuk. Az így kapott tiszta oldat összes aktivitása 2,0 TIE, ill. 650 000 KIE, hamutartalma 0,08%. fehérjetartalma 4 mg/ml. 3. példa. 10 kg marhatüdőt 30 liter, foszforsawal pH 2,0-ra savanyított vízzel kevertetünk szobahőmérsékleten, majd a szervvel együtt 70 C°-ra felmelegítjük, a szervmaradékiot melegen szűrőprésen eltávolítjuk, majd a pH-t telített Ca(OH)3-oldattal 5,3-ra állítjuk, a kivált csapadékot ülepedni hagyjuk, a tiszta oldat nagy részét leszívatjuk, és az üledéket centrifugáljuk. Az így kapott kivonat összesen 12 millió KIE-t és 48 TIE-t tartalmaz. Hamutartalma 0,106%; szerves százarazanyagtartalma: 7 mg/ml. 4. példa. 10 kg finomra darált marfha-pankreászt 30 liter 0,1 N H^SC^-val kevertünk szobahőmérsékleten 2 órán át, majd telített Ba(OH)2-ot adagolunk hozzá mindaddig, míg az oldat pH-ja 5,3 nem lesz. A szervmaradákot, a kivált BaSO^ot és a kicsapódott fehérjéket centrifugálással eltávolítjuk. A kapott tükrös tiszta oldat 4 800 000 KIE-t és 19 TIE-t tartalmaz. Ha-2
