152836. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hirudin tisztítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGALATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1965. IV. 16. (GO-950) Közzététel napja: 1965. XI. 22. Megjelent: 1966. VIII. 15. 152836 Szabadalmi osztály: 30 h 1—8 Nemzetközi osztály: A 61 k Decimái osztályozás: Feltalálók: Bagdy Dániel dr., orvos 46%, B. Barabás Éva, vegyész, 30%^ Jécsay György, vegyész, 20%, és F. Kazi Erzsébet művezető, 14%. Budapest . Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás hirudin tisztítására A találmány tárgya eljárás nyers hirudin tisztítására v cellulóz-alapú adszorbensekkel. A hirudin előállítására vonatkozó szakirodalomban igen kevés adat és eljárás található az orvosi pióca specifikus véralvadásgátló anyagának tisztításáról. Markwardt és munkatársai (Z. physiol. Chemie 308.147/1956) az abszolút etanollal szárított pióoaf ej ékből kinyert nyers hirudint elektrodialízissel, propanolos-vizes újrakivonással és papírelektroforézissel tisztítják. Módszerük nem alkalmas ipari 'méretekre, mert elsősorban a papíreléktroforézis kivitelezésekor fellépő jelentős mértékű hatóanyagveszteségek miatt nem gazdaságos, Markwardt, Walsmann, Schäfer és Töpfer későbbi eljárásukban a piócafej ékből kinyert nyers hirudint vízzel elegyedő szerves oldószerrel, célszerűen etanollal több egymást követő kicsaipásnak vetik alá, ezután oxicellulózzal kezelik, majd gyengén savas, műgyantabázisú katincserélőn adszorbeálják, végül a nagytisztasagú hatóanyagot szerves oldószeres kiesapással izolálják. Az eljárás megadott hozama a kiindulási termékre számítva mintegy 70%. Jutisz, - Charbonnel-Bérault és Martinoli (Bull. Soc. Chim. Biol. 45, 55/1963) piócafejből kiinduló soklépéses tisztítási eljárását butanolos kivonás, etanólos közegben végzett cinkacetátos kiesapás, gyengén savas, műgyantabázisú ka^ tioncserélő alkalmazása, dietilaminoetilcellulózon végzett adszorpció, végül ellenáramú ext-10 15 20 25 30 rakció jellemzi. A teljes eljárás hozama'nem éri el a kiindulási termékre számított 50%-ot. Mindezeknek a módszereknek közös jellemvonása, hogy a bennük megadott tisztítási eljárás izolált piócafejékből kinyert nyers hirudinra vonatkozik. Mindeddig nem volt ismeretes eljárás az orvosi piócákból ipari technológiával előállított nyers hirudin tisztítására. A hirudin gyógyszeripari előállítására vonatkozó korábbi kutatásaink (150 600 és 150 833 1. sz, magyar szabadalmak) folytatása során meglepő módon azt találtuk, hogy a fent idézett magyar szabadalmak-. ban lefektetett eljárások alkalmazása útján ipari technológiával előállított nyers hirudin egyszerű eljárással, könnyen kivitelezhető módon tisztítható bizonyos kation-, illetve anioncserélő cellulóz-származékok felhasználásával. Találmányunk egyik alapja az a felismerés, hogy az ipari technológiával előállított nyers hirudin tömény vizes oldatának karboxmetilcöllulózzal való kezelésekor a hirudin nem kötődik meg az adszorbensen, hanem oldatban marad, illetve az adszorbensből készített oszlopon leggyorsabban halad át, megelőzve az őt kísérő fehérje-szennyezéseket. Találmányunk további alapja az a felismerés, hogy Ecteola-cellulózon viszont megkötődik a hirudin, s ehhez az adszorbensíhez való kötődésének erőssége lényegesen eltér az őt kísérő fe-152836