152732. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására

152732 17 18 rium-, ammónium-, kálium-, kalcium- vagy magnéziumkloridot 5—50 g/liter mennyiségi arányban tartalmazó vizes alkoholos oldattal eluáljuk. Az eluátumot azután csökkentett nyomás 'alatt, 40 C° alatti hőmérsékleten kis térfo- 5-gátra töményítjük be, majd az így kapott koricentrátumot egy regenerált cellulózból készült diafragma alkalmazásával, desztillált víz-árammal szembeni dialízisnek vetjük alá. A vízaram magával viszi az ásványi sókat és a különféle 10 szennyezéseket, míg a 11,837 R. P. antibiotikum teljes egészében a dializált oldatban marad. Ez utóbbit butanól hozzáadásával, csökkentett nyomás alatt, ázeotroposan igen kis térfogatra pároljuk be. A tisztított antibiotikumot ebből a vi- 15 zes koncentrátumból olymódon választjuk le, hogy a koneentrátumihoz valamely oldószerelegyet, pl. aceton-izo'propanol elegyet adunk, esetleg oly mennyiségi arányú éter vagy diizopro- -piléter hozzáadásával, hogy a vizes fázissal való 20 elegyítéskor ne következzék be az oldószerelegy szétválása; aceton és izopropanol 4:1 térfogatarányú elegye vagy aceton, izopropanol és éter 1:1:1 térfogatarányú elegye különösen előnyösnek bizonyult erre a célra. 25 Az így kapott antibiotikumot azután még egy második tisztítási műveletnek is alávethetjük, ez abból állhat, hogy a 11,837 R. P. antibiotikum vizes oldatát valamely erős kationos jellegű ioncserélő gyantával beverjük és 2 és 3 kö- 30 zöfcti állandó pH-érték eléréséig. A gyantáról lefolyó oldatot azután valamely vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, pl. 4—5 szénatomos alifás alkohollal vagy valamely észterrel, pl. etilaoetáttal vagy ilyen oldószerek valamilyen 35 elegy ével extraháljuk. Előnyösen n-butanol és etilacetát 1:1 térfogatarányú elegyével dolgozhatunk. A szerves oldószereleggyel kirázott vizes fázist azután 1/100 térfogatra betöményítjüfc, butanolt adunk hozzá, és csökkentett nyo^ 40 más alatt, butanol folytonos hozzáadásával tovább töményítjük be. A tisztított 11,837 R. P. antibiotikumot azután e termék valamely rossz oldószerének, pl. hexánnak a hozzáadása, centrifugálás, mosás és szárítás útján nyerjük ki. 45 A fentiek során említett különféle módszereket természetesen egymással különböző sorrendben kombinálva vagy többszörösen megismételve is alkalmazhatjuk, az adott gyártási körülményeknek megfelelő módon, hogy a kívánt 50 felhasználási célnak megfelelő alakban nyerhessük a 11,837 R. P. antibiotikumot. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik; megjegyzendő azonban, hogy a talál- 55 many köre egyáltalán nincsen ezekre a példákra korlátozva. A példákban megadott antibiotikum-aktivitásokat biológiai úton, diffúziós módszerrel, Bacillus subtilis érzékeny mikroorganizmusként való alkalmazásával, a 11,837 R. ,($0 P. antibiotikum egy tiszta mintájához viszonyítva határoztuk meg. A megbatározott antibiotikum-aktivitásokat a szilárd .termékek 1 ragjára, ill. az oldatok 1 om3-jére számított/egységekben (E) adtuk meg; egységként azt a legki- 35 sebb antibiotikum-mennyiséget vettük alapul, amely 1 ml megfelelő tápközegben oldva, a megadott körülmények között gátolja a Staphylococcus aureus 209 P mikroorganizmus fejlődését. 1. példa. Egy 170 literes fermentorba az alábbi anyagokat adagoljuk be: kükoricalekvár glükóz-hidrát nátriumklorid magnéziumszulfát vízzel feltöltve 4,800 kg 2,400 kg 0,600 kg 0,120 kg 100 literre Az elegy pH-értékét 575 ml tömény nátronlúg (fs,=l,33) hozzáadásával 7,15-re állítjuk be, majd 0,600 kg kálciumkarbonátot is hozzáadunk az elegyhez. Az így elkészített tápközegét gőzbevezetés útján, 122 C° hőmérsékleten 40 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a közeg térfogata 120 liter, pH-értéke 7,15. Ezután a tápközeget a Streptomyoes viridans DS" 9466 törzs .rázott Erlenmeyer-lombiklban tenyésztett 200 ml kultúrájával oltjuk be. 26 C° hőmérsékleten 28 óra hosszat inkubálunk keverés és steril levegővel történő szellőzés közben; ezzel a kapott kultúra alkalmassá válik a termelő kultúrába történő beoltásra. A termelő kultúrát egy 350 literes fermentorban tenyésztjük, amelybe az alábbi anyagokat adagoljuk be: szójaliszt 8 kg cefre-sűrítmény 1 kg keményítő 3 kg szójaolaj 3 lit kalciumkarbonát 2 kg nátriumklorid 2 kg kobaltklorid (6 H2

0) 4 g vízzel feltöltve 180 literre Ezt a tápközeget, ^amelynek pH-értéke 7,05, gőzbevezetés útján 40 percig sterilizáljuk 122 C° hőmérsékleten. Lehűlés után a tápközeg térfogata 200 liter, pH-értéke 7,15. Ezt a tápközeget a fentemlített 170 literes fermentoírban előállított inokulum-kultúra 20 literjével oltjuk be. A fermentációt 26—27 C° hőmérsékleten folytatjuk le 138 óra hosszat keverés és steril levegővel való szellőzés közben. Ennek az időszaknak a végén a közeg pH-értéke 7,9, térfogata 180 liter. A fermentációs lében jelenlevő antibiotikum mennyisége 4515 E/ml. 2. példa. Az inokulum-kultúrát az 1. példában leírt körülmények között állítjuk elő a 170 literes fermentorban. A termelő kultúra tenyésztése 350 literes fermentorban történik, amelybe az alábbi anyagokat adagoljuk be: 9