152696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok termelésére
1526Ó6 9 10 történő kinyerése, a mikroorganizmusokból származó termékek kinyerése, valamint a mikroorganizmusok anyagcseréje, során fel nem használt szénhidrogénfrakciók kinyerési módjának megjavítása céljából lefolytatható további mű- 5 veleteket az alább felsorolt szabadalmi bejelentéseink leírása ismertet, E műveletek bármelyikének az itt leírt eljárással kapcsolatban történő alkalmazása szintén a jelen találmány körébe tartozik. 10 A mikroorganizmus tenyésztése és a termékek kinyerése során alkalmazható előnyös módszereket a 914 567 sz. brit szabadalom, továbbá az 1 316 506, 1 320 058, 1 334 466, 1 340 225, 1 361 910, 1 384 251, 1 384 252, 1 384 253, 1 385 717, 1 385 718, 13 1385 719, 1385 721 és 1385 722 sz. francia szabadalmak leírása ismerteti. Az eljárás egyes műveletei teljes egészükben szakaszosan hajthatók végre. Ka azonban kívánatos, bármely itt leírt műveletet vagy mű- 20 veleteket folytonos üzemben is lefolytathatunk. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módját közelebbről az alábbi kísérlet leírása és az alábbi példa ismerteti; megjegyzendő azonban, bogy a találmány köre egyáltalán nin- 25 csen erre az ismertetésre korlátozva. A példában a sejtsűrűség kifejezésére a kultúra 1 literjében jelenlevő élesztő száraz súlya szolgál. A kísérlet csupán összehasonlítási célokra 30 szolgál; az abban leírt műveletek nem a jelen találmány szerinti eljárásnak felelnek meg. Kísérlet: 35 40 liter vizes ásványi tápközeget bevittünk egy rozsdamentes acélból készült, 60 liter hasznos űrtartalmú f ermentorba. Inokulumként Candida lipolytica 24 órás kultúrájának 20 literjét (normál paraffinos szén- 40 hidrogéneken tenyésztett, stacioner fejlődési fázisban levő, 5 g/liter sejtsűrűségű kultúra) adtuk ezután a fermentor tartalmához, az így kapott sejtsűrűség a fermentorban kb. 1 g/liter volt. 45 15 g/liter nehéz gázolajat adagoltunk be ezután a fermentorba, ami 1,03 liter összes menynyiségnek felel meg; ez elegendő ahhoz, hogy a sejtsűrűséget 2 g/liter szintre emeljük. A hőmérséklet 30+1 C° szinten tartottuk, a 50 pH-értéket 4-re szabályoztuk, és oly mértékű szellőzést és keverést alkalmaztunk, hogy a közeg 1 literjére számított percenkénti betáplált oxigénmennyiség 3 millimólnak felelt meg. Egy önműködő pH-szabályozó rendszer útján 55 10 n vizes ammóniumhidroxid oldatot adagoltunk be a fermentációs rendszerbe. Amikor a betáplált ammónia mennyisége elérte a 20 ml-t, megkezdtük a gázolaj beadagolását oly mennyiségi arányban, amely megfelelt a kultúra el- 60 méleti szükségletének, feltételezve, hogy az élesztőhozam és a sejtosztódási idő 3 óra. Ezt a hozzáadást óránként végeztük mindaddig, míg a hozzáadott gázolaj teljes mennyisége el nem érte a 250 g/litert, vagyis összesen 17 litert. A hozzáadást 15 óra hosszat folytattuk. 1 g/ liter sejtsűrűséggel indulva, 5 órás késleltetési szakasz következett, azután a fejlődés 3 óra hosszat tartó gyorsulási szakasza, végül pedig egy exponenciális fejlődési szakasz volt tapasztalható, amelynek során 22 óra alatt 18 g/liter sejtsűrűséget értünk el. Példa: A fenti kísérletben leírt eljárást megismételtük, de azzal az eltéréssel, hogy inokulumként melaszon tenyésztett 24 órás Candida lipolytica kultúra (sejtsűrűség 6 g/liter, a növekedés stacioner szakaszában) 20 literjét alkalmaztuk. Az inokulum tenyésztésére 30 g/liter répamelaszt alkalmaztunk, amely egyéb növekedési faktorok mellett 0,04 mg/kg biotint, 50 mg/kg pantoténsavat és 5 mg/kg inozitot tartalmazott (e három faktor különösen értékes az élesztő fejlődése szempontjából). Ennek az inokulumnak nehéz gázolaj beadagolásával történő továbbtenyésztése során késleltetési szakasz egyáltalán nem következett be, a kultúra azonnal a maximális fejlődés szakaszába lépett (sejtosztódási idő 3 óra). A fenti kísérlet és a példában leírt eljárás során alkalmazott vizes tápközeg összetétele a következő volt: diammóniumfoszfát káli um klorid magnéziumszulfát—7H2O cinkszulfát mangánszulfát—H20 vas(II) szulfát—7H2 0 élesztőkivonat vízvezetéki víz desztillált vízzel feltöltve 2 g, 1,15 g, 0,65 g, 0',17 g, 0,045 g, 0,068 g, 0,025 g, 200 g, 1000 ml-re. 100 X termelt élesztő betáplált gázolaj 10% 65 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás mikroorganizmusok termelésére, amelyre jellemző, hogy az eljárás előkezelési szakaszában egy mikroorganizmust szén, hidrogén és oxigén tartalmú vegyületet tartalmazó előkezelési tápanyag jelenlétében tenyésztünk, majd a mikroorganizmus fejlődési szakaszában az előkezelési szakasz során kapott mikroorganizmust egyenesláncú szénhidrogént tartalmazó kiindulóanyag jelenlétében tenyésztjük tovább. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy az előkezelési szakaszban tápanyagként szénhidrátot alkalmazunk. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy a szénhidrát tartalmú tápanyagként melaszt, malátakivonatot, sörcefrét, fa hidrolízise útján kapott cukrokat vagy a papírgyártás során nyert szennylúgokat alkalmazunk. 5
