152548. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy eddig ismeretlen polipeptid előállítására
5 152548 majd vizes ammóniával mossuk. Azután az oldatot nátriumszulfáton szárítjuk, majd az etilacetátot vákuumban elpárologtatjuk és a maradékot 1 liter absz. etanolban oldjuk. Az oldatot 0 C° hőmérsékletre hűtjük, ammóniával telítjük és éjjelen át 20 C° hőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldatot azután vákuumban, 30 C° hőmérsékleten bepároljuk, a maradékot pedig dimetilformámid-etilacetát elegyből átkristályosítjuk. Ily módon 58 g N-karbobenzoxi-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamidot kapunk, amely 122 C-on bomlás közben olvad; («D 22 = _46° (95%-os jégecetben). c) N-karbobenzoxi-L-glutammil-L-aszparaginil-S-benzil—L-ciszteinil-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamid d) N-karbobenzoxi-SJ benzil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-N-delta-p-tolucílszluMonil-Ir-ornitil-gliciniamid 50 g N^karbabenzoxi-L-glutaminil-L-aszipara^ ginil-S-benzil-LHCiszteinil-L-propil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamidot 250 ml brómhidrogénsawal telített vízmentes ecetsavban oldunk és az oldatot 20 C° hőmérsékleten 1 óra hosszat állni hagyjuk. Azután az oldószert vákuumban, 40 C° alatti hőmérsékleten bepároljuk, a maradékot dietiléterrel gondosan mossuk és hozzáadjuk 31,5 g N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-fenilalanin-azid és 7,5 ml trietilamin 250 ml dimetilformamiddal készített oldatát. Az elegyet 20 C° hőmérsékleten két napig állni hagyjuk, majd 1000 ml etilacetátot adunk hozzá és a csapadékot elkülönítve, etilacetáttal mossuk. Azután a terméket vákuumban 30 C° hőmérsékleten szárítjuk, majd meleg metanollal mossuk. Ily módon 45 g N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-fenilalanil-L-glutaminíl-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-N-delta-p-to^ luolszulfonil-L-ornitil-glicinamidot kapunk, amely 224 C°-on olvad; («)D 2 i = —41° (dimetilf or mami dban). e) L-ciszteinil-L-tirozil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszparaginil-L-ciszteinil-L-prolil-L-ornitil-glicinamid 5 g N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszparaginil-S--benzil-L-ciszteinil-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L^ornitil-glicinamid 1200 ml vízmentes cseppfolyós ammóniával készített oldatához, keverés közben, az oldat forrpontjának megfelelő hőmérsékleten annyi fém-nátriumot vagy fémkáliumot adunk, míg az oldat állandó kék színeződést nem mutat. Ezután 3 g ammóniumklo^ ridot adunk az oldathoz, majd szárazra pároljuk be. A maradék tartalmazza a L-ciszteinil-L--tirozil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszparaginil-L-ciszteinil-L-prolil-L-ornitil-glicinamidot. f) Az (I) képletű polipeptid-vegyület Az e) szerint kapott maradékot 5 liter 0,01 n ecetsavoldatban oldjuk és 6,5—8,0 pH-értéken, levegő vagy oxigén bevezetésével, 1 óra hoszszat oxidáljuk 0 C° és 40 C° közötti hőmérsékleten. Az oldatot azután, amely a kívánt termé'ket tartalmazza, 4,0 és 5,0 közötti pH-értékre állítjuk, 50 g nátriumkloridot vagy 0,64 g metánszulfonsavat adunk hozzá és szárazra pároljuk be, amikor is jól eltartható száraz port kapunk. Ez a por ebben az állapotban tárolható és használatkor oldva, tiszta oldatot ad. A fenti módon kapott oldatot azonban közvetlenül — esetleg vízzel vagy valamely sóoldattal való felhígítás után — is felhasználhatjuk. 2. példa: Az 1. példában leírthoz, hasonló módon járunk el, az eljárás utolsó lépésében azonban az oxidációt oly módon folytatjuk le, hogy az oxidálandó oldathoz 0 C° és 40 C° közötti hőmérsékleten (levegő vagy oxigén bevezetése útján történő oxidálás helyett) 7,5 ml vizes n-hidrogénperoxid-oldatot adunk, 4,0 és 9,0 közötti pH-értéken. lü 15 20 25 30 35 40 45 50 100 g N-karbabenzoxi-L-prolil-N-delta-p-touoJszulfonil-L-omitil-glidnamidot 500 ml 20 brómhidrogénsawal telített vízmentes ecetsavban oldunk, az oldatot 20 C° hőmérsékleten 1 óra hosszat állni hagyjuk, majd vákuumban 40 C° alatti hőmérsékleten bepároljuk. A maradékot dietiléterrel gondosan mossuk, majd 25 hozzáadjuk 100 g N-karbobenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-azid és 26 ml trietilamin 1000 ml dimetilformamiddal készített oldatához. Az elegyet éjjelen át 20 C° hőmérsékleten állni hagyjuk, majd 3000 ml 30 etilacetátot adunk hozzá, a csapadékot leszűrjük és etilacetáttal mossuk. Ily módon 105 g N-karbobenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-N-delta-p-toluolszulfonil-L-ornitil-glicinamidot kapunk, amely 193 35 C°-on olvad; (x)D 20 = —38,5° (dimetilformamidban). ?
