152435. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a B12-vitamin csoportba tartozó vegyületek előállítására
152435 5 6 A kenyérhidrolizátumot a táptalaj többi komponensétől elkülönítve sterilizáljuk 120 C°-on 40 percig. A felhasznált oltóanyag mennyisége 25%. Oltás után a pH-t 6,8—7,0-re állítjuk ammóniumhidroxiddal, a hőmérsékletet 28 C°-on tartjuk. A fermentáció folyamán a pH-t 4 óránként ammóniumhidroxiddal 6,8—7,0-re korrigáljuk. 44 órás fermentálás után 1 mg/l mennyiségű 5,6-dimetilbenzimidazolt adagolunk a fermentlé B12 -vitamin-tartalma papírkromatográfiás módszerrel mérve 16 mg/l. 40 m3 fermentlé pH-ját 7—7,5-re állítjuk és szűrőprésen leszűrjük. Az átfolyó lét elengedjük, a présen maradt csapadékot, — mely a baktériumtesteket is tartalmazza, •— vízzel mossuk, majd a prés szétszedése után a csapadékot összegyűjtjük és vízzel felszuszpendáljuk, hogy a térfogata 6 m3 legyen. Formaiint adva hozzá, és FeCl3 -dal csapadékot képezve felfőzzük. Utána ismét szűrjük, a csapadékot kimossuk. A szűrletet — mely a B12 -t tartalmazza — vákuumban bepároljuk kb. 400 l-re. A kivált csapadéktól szűrősegédanyaggal szűrjük, majd benzilalkohollal extraháljuk, az elválasztás után a benzilalkoholt ammónszulfátos vízzel mossuk, majd széntetrakloriddal a benzilalkoholból vízbe szorítjuk az anyagot. A vizes oldatból fenollal extrahálva, Al2 0 3 -n kromatograf áljuk, majd kristályosítjuk. 315 g kristályos Bia-vitamint nyerünk ki. 4. A találmány szerinti fermentációval például az alábbiak szerint állítható elő állattakarmányként alkalmazható készítmény: A 3. példa szerint előállított fermentléből Z5 1 m3 -t szűrőprésen leszűrünk. A présen maradt csapadékot, mely a baktériumtesteket is tartalmazza vízzel mossuk. A prés szétszedése után a csapadékot összegyűjtjük, 5 kg nátriumkloridot adunk hozzá és felszuszpendáljuk, hogy szi- 40 vattyúzható legyen. Ezután niró-készülékben megszárítjuk. 12,3 kg Bi2 -vitaminszerű anyago-10 15 20 25 30 kat tartalmazó port nyerünk, amely 384 y/mg Lactobacillus leichmanni értéket mutat. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás cianokobalamin, hidroxokobalamin és egyéb B12 -vitamin csoportba tartozó, biológiailag aktív vegyület előállítására, Propionibacterium shermanii törzs anaerob fermentációjával, amelyre jellemző, hogy az új Propionibacterium shermanii 104/b törzset (melyet az Országos Közegészségügyi Intézetnél 630.903/24 sz. alatt deponáltunk), melyet ismert Propionibacterium shermanii törzsből kobalt ionokkal való mutáció útján állítottunk elő, 2—4% kukoricalekvárt és 2—10% glükóznak megfelelő hidrolizátumot, előnyösen kenyérhidrolizátumot tartalmazó táptalajon anaerob körülmények között fermentálunk, kívánt esetben a baktériumtesteket a fermentléből szűréssel eltávolítjuk, majd vízben formaimnál és ferrikloriddal felfőzve féltárjuk és bepárlással izoláljuk a B12 csoportba tartozó vegyületet. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy a fermentáció időtartama a táptalaj koncentrációjától függően 40—96 óra. 3. Az 1—2. igénypontok szerinti eljárás; foganatosítási módja, melyre jellemző, hogy a baktériumtesteket a fermentléből pH = 6,8—7,5 értéken való szűréssel nyerjük ki. 4. Az 1—3. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, melyre jellemző, hogy a baktériumok forróvizes extraktumát bepároljuk a fermentiere vonatkoztatott század térfogatra és ismert módon tisztítjuk. 5. Az 1—4. igénypontok szerinti eljárás továbbfejlesztése, amelyre jellemző, hogy a B-vitamin csoportba tartozó vegyületet humán gyógyászati termékké, vagy állattakarmánnyá dolgozzuk fel. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 658960. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.
