152238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergolinvázas vegyületek előállítására bioszintézissel
3 A törzsszabadalomban védett találmány továbbfejlesztése során ezt a tenyészetet az időközben bejelentett 151.724 lajstromsz. szabadalmunkban leírt differenciáló táptalajon végzett ismételt szélesztésnek és a színeződés alapján történő szelekciónak vetettük alá; ezen az úton e tenyészetnél egy olyan új, az eredeti tenyészet általános tulajdonságaitól eltérő és annál előnyösebb térmelőképességú törzset sikerült elkülönítenünk, majd az említett szabadalmunkban leírt eljárás segítségével tiszta, homogén egysejt-kultúrábari is előállítanunk, amely szintén klavin típusú alkaloidokat, de főként ergometrint, ergokrisztinben dús ergotoxint termel, termelőképességének szintje a törzsszabadalomban leírt törzsénél magasabb, és ezt a mennyiségi és minőségi szempontból egyaránt igen előnyös termelőképességét sorozatos át' oltások után is megtartja. Ezt az új Claviceps purpurea mutáns törzset, amely az eddig ismert és leírt, szaprofita alkaloida termelésre képes törzsektől mind termelőképességének stabilitása, mind pedig a termelt alkaloidelegy minőségi összetétele szempontjából lényegesen különbözik, az Orsz. Közegészségügyi Intézetnél 1963. április 4-én 22. sz. alatt letétbe helyeztük. Ez az OKI 22/1963. nyilvántartási számú új törzs morfológiailag az alábbi módon jellemezhető: 8% malátakivonat agáron tenyésztve 26 C°-on, 11 napos inkubálás után: Telepátmérő 18 mm, a telep színe: halványsárgás fehér; a telep hátoldala halvány okkersárga; a telep szerkezete: lapos, bársonyos, pókhálószerű szegélyű. Mikroszkópi kép szerint a telep széle erőseri szubmerz, sok harántfallal tagolt hifákból áll, gyakran keletkeznek hólyagszerűen puffadt interkaláris, vagy terminális sejtek. A micélium kevéssé fénytörő. A telep légmicéliumos középső részén torzulásszerűen görbült, erősen fénytörő, szemcsés hifák láthatók. A normális hifák 3—4,5 mikron átmérőjűek, a puffadt sejtek 18—20 mikron átmérőt is elérhetnek. » 18 napos inkubálás után: Telepátmérő 30 mm, poros felületű, középen kevés konidium, vagy hifafragmentum található, amelyek mérete 10—13,5X4—5 mikron, ami jóval meghaladja a természetes szubsztrátumon található komdiumok méreteit. Burgonya-dextróz agáron tenyésztve, 26 C°-on, 11 napos inkubálás után: v Telepátmérő 20 mm, a telep szegélye fehér, köépső része egyre sötétedő szürkés lila. Telepszerkezet tömör, nemezes, kúpos alakú, a telep alatt a micéliummal átszőtt agár a teleppel együtt felemelkedik és elválik az üvegtől. A telep éles szegélyű, sugarasan ráncos. A hátoldalon kialakult micélium bevonat lazább szerkezetű és halványabb lila színű, mint a felületi telep. A telep hátoldalának színe barnás-lila. Mikroszkópi kép szerint a telepet az előbbinél 5 egyöntetűbb hifák alkotják, a hifák rövid, csaknem szabályos oldalágakat képeznek, vas^tagságuk 4 mikron, a harántfalak távolsága 7— 25 mikron között változik. Plazmájuk egyenletes, kevés puffadt sejt található. Konidiumkép-10 ződés nem figyelhető meg. A micéliurnmal átszőtt sötét lilásbarna agár a szklerocim medulla állományára emlékeztető szerkezetű, metszetben prozenchimatikus, pszeudoparenchimatikus szerkezetű. 15 18 napos inkubálás után: Telepátmérő 28 mm, színe sötét szürkésJila, keskeny fehér szegéllyel. Konidiumképződés 20 nem figyelhető meg, a pszeudoparenchimatikus rész 11—18X9—13,5 mikron méretű, ül. 10—12 mikron átmérőjű sejtekből áll. Alámerülő kultúrában a micélium 0,1—4 mm nagyságú göböcskéket képez; a mikroszkópi kép 25 sűrűn elágazó, sok zsírszemcsét tartalmazó micélíumot mutat. Cukortartalmú táptalajon konidium, vagy klamido spóraképzés nincs. Az új törzs szaprofita alkaloidtermelés céljából történő tenyésztésére oly szintetikus táp-30 talajt alkalmazhatunk, amely nitrogénforrásként ammóniát, vagy valamely szerves amint, szénforrásként dextrózt, szacharózt, vagy szorbitot és emellett egy szerves savat, mégpedig borostyánkősavat, almasavat, citromsavat, vagy 35 aszparaginsavat tartalmaz, a nitrogénforrásul szolgáló bázissal képezett só alakjában; Szükség van továbbá a táptalajban a szokásos szervetlen sók (Ca, K, Mg, Cl, P04 és S0 4 ionok) jelenlétére is. 40 Ä találmány tárgyát tehát a törzsszabadalom szerinti eljárás továbbfejlesztéseként oly eljárás képezi ergolin vázas vegyületek, főként ergometrin, valamint ergokrisztinben dús ergotoxin szaprofita kultúrában történő termelésé-45 re, amelynek során az OKI 22/1963. sz. alatt törzskönyvezett új Claviceps purpurea mutáns törzset alámerülő, vagy felületi kultúrában oly táptalajon tenyésztjük, amely nitrogénforrásként ammóniát, vagy szerves amint, szénforrás-50 ként dextrózt, szacharózt, vagy szorbitot, a nitrogénforrásul szolgáló bázissal sót képező szerves anionként borostyánkősav-, almasav-, citromsav-, vagy aszparaginsav anion, továbbá szervetlen sókat tartalmaz. 55 A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módját'közelebbről az alábbi példák szemléltetik: 60 1- példa: Egy keverőberendezéssel felszerelt, levegőztetett 10 literes össztérfogatú laboratóriumi fermentorba 6 liter alábbi összetételű táptalajt 65 viszünk be: 2
