152173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás heparin tartalmú szervkivonatok egyszerű letisztítására
5 152173 e ecettél pH 4-re visszük le. 40 ml vízben 8 g BaC^-ot oldunk és állandó keverés közben a heparin oldathoz öntjük. 'Egy órai várakozás után a csapadékot oentrifugálással elválasztjuk, majd az oldathoz 60 ml vízben oldott újabb 12 g BaC^ot adunk. Az oldat változatlanul tiszta marad. Az oldat térfogatát lemérve, annyi jégecetet öntünk hozzá, hogy az ecetsav koncentráció 35%-ot érjen el. Jelen esetben klb. 300 ml szükséges. Egy órai hideg tárolás után a kivált heparin-bárium sót oentrifugálással elválasztjuk. A csapadékot 300 ml hideg deszt. vízben oldjuk, 30%-os 'NaQH oldattal pH-ját 7-re állítjuk, majd NaHCI03 -at addig adagolunk az oldathoz, míg pH-ja 8,5 nem lesz. IflKb. 22 g Ná;HC03 szükséges.) A csapadékos oldatot 1,2—1 óráig 70 C°-on tartjuk, ezt követően pedig lehűtjük és lecentrif ugarjuk. Amennyiben a centrifugált oldat opálos lenne, úgy további kevés NaH003-dal az oldat tükrösen tisztává deríthető, illetve egy éjjelen, át történő hidegtárólás alkalmával minden kolloidális csapadék leválik. Az előzőekben 70C°-on kezelt oldatot — melyet előzőleg szobahőmérsékletre lehűtöttünk —, pH-ját 6—7 közé állítjuk 2n HlCl-el és térfogatát kitevő 40 térf.% etanollal elkeverve hideg szobában állni hagyjuk, hogy hőmérséklete 0 és +5 C° között állandósuljon. A csapadékos oldatot azután lecentrifugáljuk, majd absz. alkohollal leszárítjuk. 14,5 g halvány^sárgás árnyalatú fehér port kapunk, mely általában 120—130 NE/mg antikoaguláns aktivitású. 2. példa: 300 g előző példában jellemzett csapadékhoz 2,100 ml desztillált vizet adunk, pH-ját 2n NaOH-dal 7,5 és 8,5 közé állítjuk, miközben gondoskodunk arról, hogy a csapadékot jól elszuszpendáljúk. A beoldódás után a durvább szennyeződéseket centrifugáljuk, majd pH-ját 5 jégecettel 4-re állítjuk. Térfogatát lemérjük és 2% nátriumacetáttal az oldat hidrogénionkoncentrációját stabilizáljuk. Ezután 210 ml 15%-os csersav-oldatot öntünk hozzá. A levált voluminózus csapadékot centrifugálással eltálö volítjuk, a csapadékot 500 ml 0,5—1% csersav és 2% nátriumaoetáttal stabilizált pH 4-es vizes oldattal átmossuk. Az egyesített szupernatánshoz 1% konyhasót adunk, egyenlő térfogatú etanollal, 15 C°-ot meg nem haladó 15 hőmérsékleten, kb. 2 órai várakozás után, a heparint kicsapjuk. A továbbiakban már az első példában ismertetett módon járunk el. 20 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás tiszta heparin kinyerésére heparintartaímú nyers (vagy« részlegesen tisztított) szervkivonatokból, azzal jellemezve, hogy a 25 fehérje-heparinkomplexet tartalmazó nyers oldathoz csersavat adunk, a levált csapadékot eltávolítjuk és a tiszta oldatból a heparint önmagában: ismert módon kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli 30 módja, azzal jellemezve, hogy a komplex megbontását és a fehérjék lecsapását a csersav 2 és 5 közötti, előnyösen 4 körüli pH-értéken történő 'hozzáadásával végezzük. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás 35 azzal jellemezve, hogy a műveletet 0—50 C° hőmérsékleten végezzük. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kivitele azzal jellemezve, hogy aeetátpufferral stabilizált közegben végezzük a le-40 választást. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 657544. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest v., Balassi Bálint utca 21—23.
