152161. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új WG 696 antibiotikum előállítására
152161 9 10 ridos oldatban felvett infravörös színkép jellemző sávokat mutat 960, 970, 1032, 1084, 1224, 1245, 1376, 1735, és 2970 cm~i értéknél. 5 g fenti módon előállított WG 696 vegyületet 50 ml pentánban oldunk. A kapott oldatot lassan, keverés közben —70 C° hőmérsékletre hűtjük le, amikor is a vegyület színtelen kristályok alakjában leválik. A kristályokat leszűrjük, hideg (—50 C° és —70 C° közötti hőmérsékletű) pentánnal mossuk, majd megszárítjuk. Ily módon 4,6 g kristályos WG 696 vegyületet kapunk, amelynek olvadáspontja 46 C°. A kapott termék elemi analízise, optikai forgatóképessége, infravörös és ibolyántúli színképe azonos a fentemlített olajszerű termékével. ' 3. példa: Egy 200 literes kísérleti üzemi fermentorban 1O0 liter alábbi összetételű tápközeget viszünk be: glicerin 7,5 g kukoricalekvár (50%-os) 2,5 g glükóz 50,0 g Staley-féle tápanyag (szőjaliszt) 15,0 g MgSQ4 0,05 g KH2 P0 4 0,06 g FeS04 0,005 g CuS04 0,004 g csapvízzel feltöltve 1000 ml-re. Ezt a tápközeget 6,5 pH értékre állítjuk be és 120 C° hőmérsékleten 30 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a fermentor tartalmát beoltjuk a Trichoderma viride Leo NB 8 törzs 0,5 liter vegetatív kultúrájával, amelyet úgy nyerünk, hogy a mikroorganizmust rázópalackban, alternáló mozgású rázóberendezésen 48 óra hosszat inkubáltátjuk 27 C° hőmrésékleten, a fentivel megegyező összetételű, de glükózt csak 1% koncentrációban tartalmazó táptalajon. A kísérleti üzemi fermentorban a fermentációt 72 óra hosszat folytatjuk 27 C° hőmérsékleten, keverés és szellőztetés közben. A fermentáció befejeztével a fermentációs lében >250 mcg/ml WG 696 mutatható ki (ágár-csészés módszerrel, Candida albicans mikroorganizmus kísérleti organizmusként való alkalmazásával). 25 liter derített fermentációs levet 8,0 pH értékre állítunk be és 40—50 C° forrpontú petroléterrel kétszer extraháljuk. Az egyesített petroléteres kivonatot, amelynek térfogata 6 liter, 1 liter vízzel mossuk, szárít-5 juk és szirupsűrűségűre bepároljuk; a bepárolási maradékot azután 50 ml pentánban oldjuk. Az oldatot lassan, keverés közben —70 C° hőmérsékletre hűtjük le, amikor is a WG 696 vegyület színtelen kristályok alakjában leválik. 10 A kristályokat szűréssel elkülönítjük, hideg pentánnal mossuk és megszárítjuk. Ily módon 5,2 g WG 696 vegyületet kapunk, amelynek olvadáspontja 44-^46 C°. Az így kapott terméket ismét feloldjuk 50 ml 15 pentánban és a kristályosítási műveletet megismételjük, oly módon, hogy az oldatot keverés közben —20 C° hőmérsékletre hűtjük le. A levált kristályokat hideg (—50 C° és —70 C° közötti hőmérsékletű) pentánnal mossuk és meg-20 szárítjuk. 4,6 g WG 696 vegyületet kapunk, amelynek olvadáspontja 46 C°; forgatóképessége [a]2°D = —11° (1%, kloroformban). Szabadalmi igénypontok: 25 1. Eljárás a WG 696 antibiotikum előállítá*sára, azzal jellemezve, hogy a Trichoderma viride Leo NB 8 mikroorganizmust (letétbe helyezve az American Type Culture Collection 30 gyűjteményében, ATCC 14.910 sz. alatt) vagy ennek egy WG 696 antibiotikum termelésére képes természetes vagy mesterséges mutánsát vagy variánsát, asszimilálható szénforrást és asszimilálható nitrogénforrást tartalmazó vizes 35 tápközegben aerob körülmények között addig szaporítjuk, míg a közegben számottevő menynyiségű gombaellenes aktivitás nem mutatkozik, majd az így termelt WG 696 vegyületet kinyerjük. (Elsőbbsége: 1963. január 3.) 40 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a WG 696 vegyületet valamely szerves oldószerrel vagy oldószereleggyel extraháljuk a fermentációs léből, a szerves fázist különválasztjuk és ebből nyerjük 45 ki a WG 696 vegyületet. (Elsőbbsége: 1963. január 3.) 3. A 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, a WG 696 vegyület kristályos alakban történő kinyerésére, azzal jellemezve, hogy az em-50 lített szerves fázist betöményítjük, majd a kapott maradékot —10 C° alatti hőmérsékletre hűtjük le valamely alacsony forrpontú alifás szénhidrogén jelenlétében. (Elsőbbsége: 1963. január 22.) 1 rajz, 1 ábra A. kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi könyvkiadó igazgatója 657543. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest, V., Balassi Bálint utca 21—23.
