152161. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új WG 696 antibiotikum előállítására

Í5216Í 6 II. táblázat Mikroorganizmus IC50 mcg/ml Candida albicans ATCC 10231 0,25 Candida albicans LSH Z248 0,32 Candida parakrusei 0,28 Candida parakrusei 0,40 Candida utilis 0,25 Aspergillus fumigatus CBS 16 Trichophyton mentagrophytes CBS 0,32 Trichophyton mentagrophytes CBS 0,40 Saccharomyces cerevisiae 0,10 Gliocladium deliquescens 5,0 Verticillium sp. 4,0 \ Cephalosporium sp. 5,0 Fusarium sp. 2,5 Fusarium sp. 1,0 Fusarium sp. 3,2 Mucor flavus 3,2 Cunninghamella elegáns 3,2 Cunnighamella blakesleana 3,2 Absidia cylindrospora 1,3 Rhizopus nigricans 1,3 Penicillium sp. 1,6 Penicillium sp. 3,2 Aspergillus sp. 12,5 • Aspergillus 'flavus « 12,5 Pseudomonas aeruginosa > 100 Staphylococcus aureus > 100 Sarcina lutea FDA. 1001 > 100 Streptococcus pyogenes NCTG 6175 > 100 Corynebacterium xerosis NCTC 9755 > 100 KlebsieUa pneumoniae > 100 Salmonella typhimurium NCTC 5710 > 100 Bacillus subtilis > 100 Vibrio comma BCTC 8367 > 100 Látható a IL táblázatból, hogy a WG 696 vegyület az alkalmazott koncentrációkban baktériumok ellen csak csekély hatást mutat, míg kiemelkedően jó hatással rendelkezik mind a patogén, mind a nem-patogén gombákkal szemben, beleértve a mezőgazdaságban és iparban kárt okozó gombákat is. Meg kell azonban jegyezni, (hogy a fenti kísérletek során tapasztalt csekély baktériumellenes hatás nem zárja ki annak lehetőségét, hogy a WG 696 vegyületet nagyobb koncentrációkban bizonyos baktériumok ellen alkalmazzuk; a vegyület általános citosztatikus aktivitása folytán még további alkalmazási területek is tekintetbe jöhetnek. Így kísérletileg kimutattuk, hogy a WG 696 vegyület kis koncentrációkban is gátolja bizonyos tumorsejtek fejlődését; gátló hatásúnak mutatkozott pl. szövetkultúrában az emberi epidermoid nasopharynxcarcinoma ellen. Elsősorban azonban e vegyület specifikus gombaellenes hatása teszi alkalmazását előnyössé az ember- és állatgyógyászatban. Figyelemreméltó ebből a szempontból e vegyület kisfokú toxikussága is. Az állatkísérletek során, amikor a vegyületet növényi olajos oldatban szubkután adtuk be egereknek, 500— 1000 mg/kg LD50 értéket tapasztaltunk, míg az ugyanilyen alakban orálisan történt beadás esetén az LD50 érték 10O0 mg/kg felett volt. A vegyület helyi alkalmazása esetén nem tapasztaltunk semmilyen káros hatást a bőrön, mi mellett a vegyület igen hatásosnak bizonyult 5 az emberi és állati mikózisok helyi kezelésére. Így ez a vegyület klinikai alkalmazásban különösen' jó hatást mutatott emberek Candida albicans gombával történt bőr-fertőzéseinek gyógykezelése során; a WG 696 vegyülettel 10 olyan súlyos fertőzések is teljesen gyógyíthatók^ nak bizonyultak, amelyek más ismert gombaellénes szerrel nem voltak eredményesen kezelhetők. A találmány szerinti eljárás lényege az, hogy 15 a Trichoderma viridé Leo ND 8 mikroorganizmust vagy annak valamely, WG 696 termelésére képes természetes vagy mesterséges mutánsát vagy variánsát aerob körülmények között szaporítjuk oly vizes tápközegben, amely asszi-20 milálható szénforrást és asszimilálható nitrogénforrást tartalmaz, majd számottevő mértékű, antibiotikus (gombaéllenes) aktivitásnak az oldatban való képződése után az így termelt WG 696 vegyületet kinyerjük a fermentációs közeg-25 bői. A találmány szerinti eljárás kivitele során a WG 696 képződésének mértékét a fermentáció egész folyamán a szokásos aktivitás-mérő módszerekkel határozhatjuk meg a fermentációs íé 30 szüredékében; erre a célra jól alkalmazható az ismert ágár-csészés módszer, Candida albicans mikroorganizmus felhasználásával. A WG 696 félüzemi mértékű termelése során szerzett tapasztalatok szerint a termék maxi-35 malis hozamát 48-^-96 órai fermentációval értük, el, 20 C° és 30 C° közötti, előnyösen 27 C° körüli hőmérsékleten. A megadott hőmérséklethatárok azonban nem feltétlenül elhatároló jellegűek, minthogy az 40 említett hozamok eléréséhez szükséges legked. vezőbb időtartam és hőmérséklet bizonyos fokig az alkalmazott fermentor mechanikai szerkezetétől és a keverőberendezés típusától is függ. , A találmány szerinti eljárásban különféle is-45 mert teljes és minimális tápközegek bizonyultak használhatóknak. Szén- és energiaforrásként azonban a cukrok előnyösebbeknek mutatkoztak a zsíroknál; a cukrok közül különösen a glükóz, fruktóz, ga-50 laktóz, szorbóz és xilóz alkalmazható előnyösen, míg a szaccharózt és a laktózt a mikroorganizmus nem asszimilálja. A fermentáció lefolytatására jól használható tápközegek alkotórészeiként megemlíthető az W élesztőkivonat, glicerin, kazein-hidrolizátum, aminosavak, továbbá bizonyos vízben oldható Vitaminok; a fermentációs közeg pH-értékét a fermentáció megkezdése előtt előnyösen kb. 4,5 és 6,5 közöttire állítjuk be. 60 Ha a fermentáció folyamán a WG 696 termelése már megszűnik, vagy ha már kielégítő hozamot értünk el, a termelt vegyületet — előnyösen a micéliumnak a fermentációs léből, pl. .szűrés útján történő eltávolítása után — kinyer-65 jük a fermentációs léből. A WG 696 valamely 3