152069. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív oligopeptidek előállítására
17 152069 18 rí tjük. 3,48 g (98%) védett pentapeptid-amidot kapunk. («) ó =—21,5 (c = 2, metanolban). Op.: 238—238 C°, Rf: 0,78. Analízis: C36 H 52 0 7 N 6 S (712,89); 5 számított: C 80,50, H 7,35, N 11,8, S 4,5: talált: C 60,10, H 7,53, N 11,2, S 4,5. 4. példa: Z-Ala-Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH, előállítása. 1,08 g (2 mmól) Z-Ala-Phe-Ile-Gly-OH-t, 0,28 ml (2 mmól) trietilamint tartalmazó 5 ml dimetilformamidban feloldunk, majd —10 C°-on 0,2 ml (2 mmól) klórszénsavetilésztcrt adunk hozzá. Tíz percig keverjük, majd az alábbi szuszpenziót csurgatjuk a vegyes savanhidridhez: 0,9 g (2,6 mmól) H-Leu-Met-NH2 • HCl. 2,5 H20-t oldunk 3,0 ml dimetilformamidban és 0,355 ml (2,6 mmól) trietilamint adunk hozzá. Az aminkomponens adagolása után a reakcióelegy gélesedni kezd. Éjszakán át hagyjuk állni, majd vízzel hígítjuk, szűrjük, vízzel mossuk. 1,54 g (99%) védett hexapeptid-amidot kapunk. Op.: 245—248 C°. Rf: 0,98. Analízis: C39 H 57 0 8 N 7 S (783,97); számított: N 12,5; talált: N 12,4. 5. példa: a) Z-Arg-Ala-Phe-Ile-Gly-OEt • HCl előállítása. 1,42 g (3 mmól) H-Ala-Phe-Ile-Gly-OEt • HCl-t és 0,93 g (3 mmól) H-Ala-Phe-Ile-Gly-OEt • HCl-t • és 0,93 g (3 mmól) Z-Arg-OH-t együtt feloldunk 6,5 ml piridinben, majd 0,62 g (3 mmól) diciklohexil-karbodiimidet adva hozzá szobahőmérsékleten állni' hagyjuk. Hígítjuk 15 ml 50%)-os vizes acetonnal, a kivált karbamidot szűrjük, az oldatot bepároljuk és a száraz párlási maradékot acetonnal eldörzsöljük. 1,6 g (70%) védett pentapeptid-észtert kapunk. Op.: 175—177 C°. Rf: 0,73. Analízis: C36 H 53 0 8 N 8 C1 (761,30); számított: N 14,7, Cl 4,7; talált: N 14,8, Cl 4,6. b) Z-Arg-Ala-Phe-Ile-Gly-OH előállítása. 50 1,3 g (1,7 mmól) fenti védett pentapeptid-észtert feloldunk 17 ml metanolban és 0,93 ml 4 n nátrium-hidroxidot adunk hozzá. A kivált géles anyagot 0,24 ml ecetsav hozzáadása után .55 vízzel eldörzsöljük, szűrjük és vízzel mossuk, szárítjuk. 0,82 g (70%) védett pentapeptidet kapunk. Op.: 213—216 C°, 228 C°-on bomlik. Rí: 0,47. 60 c) Z-Arg-Ala~Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH 2 • HCl előállítása. 0,7 g (1,0 mmól) Z-Arg-Ala-Phe-Ile-Gly-OH pentapeptidet és 0,38 g (1,1 rnmól) L-Leu-Met- (55 -NH2 • HCl • 2,5 H20 dipeptid-amid-klórhidrátot együtt feloldunk 3 ml piridinben, rnajd 0,014 ml (0,1 mmól) trietilamint és 0,21 g (1,0 mmól) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá, és szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Két nap után a reakcióelegyet vízzel eldörzsöljük, szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. A száraz maradékot kloroformmal főzzük (a karbamid-melléktermék eltávolítása végett). Szűrjük, kloroformmal mossuk, szárítjuk. 0,8 g (82%) védett heptapeptid-kiórhidrátot kapunk. Op.:'200—203 C°, Rf: 0,59. Analízis: C45 H 70 O ! ,N 11 SCl (976,62); számított: N 15,8, Cl 3,65; talált: N 15,9, Cl 3,70. 6. példa: a) Z-His-Ala-Phe-Ile-Gly-OEt • HCl előállítása 5 mi dimetilformamidban szuszpendálunk 1,37 g (4,5 mmól) Z-His-N2 H 3 -ot és —10 C°-ra hűtve 2,87 ml 7,87 n vizes sósavat, majd 0,92 ml 5 mólos nátrium-nitrit oldatot. Keverjülc —10 C° körüli hőmérsékleten 10—15 percig, majd az így kapott azid oldatot az alábbi szuszpenzióhoz csepegtetjük: 1,42 g (3 mmól) H-Ala-Phe-Ile-Gly-OEt • HC1-ot szuszpendálunk 15 ml dimetilformamidban és 3,57 ml trietilamint adva hozzá —10 C° alá hűtjük. Az azid becsepegtetésre az aminokomponens feloldódik, majd állás közben a reakcióelegy begélesedik. Híg sósav oldattal eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk. 1,62 g (73%) védet: pentapeptid-észter-klórhidrátot kapunk. Rf: 1,0. b) Z-His-Ala-Phe-Ile-Gly-OH • HCl előállítása. A fent előállított védett pentapeptid-észter-klór hidra tból 1,48 g-ot (2 mmól) 8 ml dioxán-és metanol 1 : 1 arányú elegyében szuszpendálunk, majd 1,1 ml 4 n nátrium-hidroxid oldatot adva hozzá szobahőmérsékleten két órán át állni hagyjuk. Híg sósavval savanyítjuk, majd vízzel eldörzsölve szűrjük és vízzel mossuk, szárítjuk. 1,05 g (81%)) védett pentapeptidet kapunk. Op.: 205—206 C°. Rf: 0,5. Analízis: C3 4H 44 0 8 N 7 C1 (714,23); számított: N 13,7, Cl 5,0; talált: N 13,8, Cl 5,1. c) Z-His-Ala-Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH, előállítása. 0,65 g (0,91 mmól) fenti védett pentapeptid-klórhidrátot és 0,88 g (1,1 mmól) H-Leu-Met-NH,-HCl-2,5 H20 dipeptid-fragmentet együtt feloldunk 2 ml dimetilformamiddal, hozzáadunk 0,295 ml (2,1 mmól) trietilamint és 0,21 g (1,0 mmól) diciklohexil-karbodiimidet. Két nap után vízzel hígítjuk, eldörzsöljük, szűrjük vízzel mossuk és szárítjuk. A. száraz anyag tartalmazza a kívánt védett heptapeptid-amidot és a karbamid-rneilékterméket, melyet kloroformmal távolítunk el [6. példa c) pontjához hasonlóan]. 15 20 25 30 35 40 60 9
