152069. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív oligopeptidek előállítására
152069 3 /'; -benzüészter eltávolítása után lehetséges. Ezenkívül a karbobenzoxi csoport sem ad kielégítő védelmet, minthogy az acilezés után keletkező védett 5—11 heptapeptidben a kéntartalmú metionin is előfordul, és így a dekarbobenzoxilezés szokásos hidrogenolitikus eltávolítása a katalizátor mérgeződése miatt nehezen valósítható meg, acidolízise pedig melléktermékekhez vezet. Ezért a védett 5—8 tetrapeptid-diészter dekarbobenzoxilezése és debenzilezése után új, alkalmasabb védőcsoportot (terc.butiloxi-karbonil) vezettek be. A módszer további hátránya, hogy az 1—4 tetrapeptid szintézisében is szükség van védőcsoport-cserére. A találmány célja az eledoisin, valamint az eledoisin-szekvenciájú oligopeptidek ismert szintézisénél előnyösebb és egyszerűbb eljárás biztosítása. A találmány alapja az a felismerés, hogy az eledoisin vagy a hasonló szekvenciájú oligopeptidek molekuláját az 1—9 nonapeptid- vagy hasonló szekvenciájú Oligopeptid- és a 10—11 dipeptid-f ragmentekből jó kitermeléssel elkészíthetjük. Ez a felismerés azért meglepő, mert a nonapeptid géles konzisztenciájú, és így az volt várható, hogy az acilezési reakció a gélszerű nonapeptid és a dipeptid molekula között csak igen rossz hozammal fog lejátszódni. Ezzel szemben azt találtuk, hogy bár pl. sem az 1—9 H-Pyr-Pro-Ser-Lys(BOC)-Asp(OBuO-Ala-Phe-Ile-Gly-OH nonapeptid, sem ennek trietilammóniumsója, vagy a belőle készített vegyes savanhidrid nem oldódik az általában használt oldószerekben, pl. dimetilformamidban, hanem géllé duzzad, a reakciók a géles állapot ellenére a szokásos idő alatt és magas hozammal játszódnak le. A találmány értelmében úgy állítunk elő eledoisint, vagy hasonló szekvenciájú biológiailag aktív oligopeptideket, hogy a szintetizálandó Oligopeptid C-terminális dipeptid-f ragmen tjét a szintetizálandó Oligopeptid fennmaradó N-terminális f ragmen tjének acilezésre alkalmas származékával acilezzük. A C-terminális dipeptid-fragmentet célszerűen az N-terminális frag-4 ment anhidridjével, vegyes savanhidridjével vagy imidazol-származékával acilezhetjük. A találmány szerint járva el, az 1—9 nonapeptid-, vagy hasonló szekvenciájú oligopeptid-f ragmentek és a 10—11 dipeptid-fragment szintézise, valamint azok összekapcsolása során nincs szükség védőcsoport-cserékre, ha a karbobenzoxi-L-leucil-L-metíonin-amid dekarbobenzoxilezését folyékony ammóniában fém-nátriumos redukcióval végezzük, és az eledoisin 1—9 fragmentjében, vagy a hasonló szekvenciájú oligopeptidekben a lizins-amino csoportjának megvédésére a könnyen eltávolítható terc.butiloxi-karbonil-csoportot használjuk, az aszparaginsav /5-karboxilját pedig az ugyancsak könynyen eltávolítható terc.butilészter formában alkalmazzuk. Minthogy az 1—9 fragment, vagy a hasonló szekvenciájú Oligopeptid már nem tartalmaz metionint, színtézise során az a-amino-csoportok átmeneti megvédésére karbobenzoxi-csoport is alkalmazható. A találmány szerinti eljárás esetében az aminosavakat az N-terminális 1—2 di-, ill. 1—3 tripeptid kivételével egymás után, lépésenként kapcsolhatjuk össze, aminek következtében mind a fragmentek, mint a végtermék könnyen tisztítható. A találmány szerinti eljárás azt is lehetővé teszi, hogy az 1—9 nonapeptid- vagy hasonló szekvenciájú oligopeptid-fragmenteket és a 10— 11 dipeptid-f ragmentet vegyes savanhidrid módszerrel kapcsoljuk össze, mert az acilező peptidek C-terminálisán levő glicin racemizálódásával nem kell számolnunk. Az anhidriden keresztül történő acilezés meglepően jó, 90% feletti hozam elérését teszi lehetővé, szemben az irodalmi eledoisin-szintézis izoleucin és glicin között végzett azidos kapcsolásának 55%-os hozamával. A találmány szerinti eljárással végzett eledoisin szintézisben a lépések átlagos hozama jelentősen, mintegy 12%-kal meghaladja az irodalmi adatokból számítható értéket (84,36%, szemben a 72,63%-kal). Ha a találmány szerinti eljárással eledoisint kívánunk előállítani, célszerűen az 1. táblázatban bemutatott módon járunk el. 10 9 10 15 20 25 30
