151941. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új hormon, a placentotropin elkülönítésére

151941 tisztán, fehérjéktől mentesen elkülönítenünk és hatástanilag megvizsgálnunk. Megállapítottuk továbbá, hogy az agyfüggelék mellsőlebenye terhességen kívüli életkörülmények között nem termel placentotropint. 5 Az újonnan felfedezett és tiszta állapotban elkülönített placentotropinról is vitro kísérletekben megállapítottuk, hogy serkenti a méhlepényhám ribonukleinsav-termelését. In vivo kísérletekből pedig kitűnt, hogy a placentotro- 10 pin-termelés növekedésével szignifikánsan nő a terhes ' vérszérumának koriongonadotropin-tartalma. Kísérleteink során tehát sikerült az agyfüggelék mellsőlebenye és a méhlepény endokrin 15 működése között a szoros kapcsolatot felderíteni, és az ezt szabályozó hormont, 'a placentotropint a terhes női vizeletből elkülöníteni.' Az új hormon üzemszerű termelésének is a terhes női vizelet a kiindulási anyaga; különösen 20 előnyös e célra az a vizelet, amelyből a koriongonadotropint előzőleg, például gyógyászati célra, már kivonták. A találmány szerinti eljárás lényegében ab- 25 ból áll, hogy a vizeletet beállítjuk a koriongonadotropin izoelektromos pontjánál, 2,9 pH-nál 1—2 tizeddel nagyobb pH-értékre, előnyösen 2,9—3,0 pH-ra, és átbocsátjuk egy adszorbenssel, előnyösen hidrogénfázisban levő kation- 30 cserélő gyantával megtöltött oszlopon, amely a koriongonadotropint visszatartja. (Erre a lépésre nincs szükség, ha koriongonadotropintól mentesített vizeletből indulunk ki.) A kapott, koriongonadotropint már nem tartalmazó olda- 35 tot. nátronlúggal 7 pH-ra közömbösítjük, majd egy vízzel korlátlanul elegyedő szerves oldószerrel, előnyösen 1—4 szénatomú egyértékű alifás alkohollal vagy acetonnal kicsapatjuk belőle a nyers placentotropint. A szűréssel vágy 40 centrifugálással elválasztott csapadékot 2,8—4,5, előnyösen 3,4—3,6 pH-jú vizes savas oldatban feloldjuk, és az oldatot cellulózszálaknak nitrogéndioxiddal való kezelése útján készült, főképp celluronsavakból álló gyapotszerű adszorbens- 45 sei összerázva a placentotropint adszorbeáltatjuk. A hormont az adszorbensről 1,5—2,5 pH-jú vizes savas oldattal, előnyösen 1,9—2,1 pH-jú sósavval eluáljuk, és az oldatból alkálisóval kisózzuk vagy az oldat közömbösítése után víz- 50 zel korlátlanul elegyedő szerves oldószerrel, előnyösen 1—4 szénatomú egyértékű alifás alkohollal vagy acetonnal kicsapatjuk. A placentotropinon kívül már csak jelentéktelen szenynyezést tartalmazó csapadékot kíméletesen, 30 55 C° alatt megszárítjuk, acetonnal mossuk, - és az acetont vákuumban elűzzük. A száraz terméket kevés híg ecetsavban feloldjuk, és az oldatot kíméletesen, előnyösen fagyasztvaszárítással beszárítjuk. Az így kapott termék jól tárolható, go Befecskendezésre is alkalmas csíramentes készítményt az ismert gyógyszeripari módszerek szerint készíthetünk, például a placentotropin híg ecetsavas oldatának finomnyílású üvegszűrőn csíramentesre szűrése és a szüredék csíra- gg mentes körülmények közötti fagyasztvaszárítása útján. Az így elkülönített tiszta placentotropin könnyű fehér por, a glikoproteidok csoportjába tartozó polipeptid. Molekulasúlya- mintegy 40 000. Izoelektromos pontja vizes oldatban 7 pH körül van. A leírtakból a szakértő megismerheti a placentotroin tiszta állapotban való előállításának elvét és lényegét, a műveletek részletei tekinte1

tében az adott körülményekhez és a rendelkezésére álló eszközökhöz tud alkalmazkodni. Az alábbi példákban a placentotropin üzemszerű előállításának két lehetséges és kipróbált esetét ismertetjük, anélkül azonban, hogy a találmány szerinti eljárást az ezekben leírt körülményekne kívánnánk korlátozni. Az eljárás foganatosításának a fent ismertetett keretek között még számos egyéb módja is lehetséges. 1. példa: Tíz liter terhes női vizeletet, miután a pH-ját beállítottuk 3,0-ra, kb. 6 óra alatt átbocsátottunk egy hidrogénfázisban levő Amberlit IRC—50 kationcserélővel (térhálós polimetakrilátszármazék), töltött 600 mm magas és 90 mm belső átmérőjű oszlopon. Az ioncserélő a vizeletből visszatartotta a koriongonadotropint. A lecsepegő, koriongonadotropintól mentes oldatot beállítottuk nátronlúggal 7 pH-ra, majd 40 liter metanolt adtunk hozzá, és 24 órán át ülepedni hagytuk. Ezalatt a placentotropin és más polipeptidek és egyéb fehérjeszerű anyagok kicsapódtak, és az edény fenekén összegyűltek. A folyadék tisztáját leöntöttük, a csapadékos részt kicentrifugáltuk, és a csapadékot kíméletesen, 30 C° alatt megszárítottuk; a nedvesség utolsó nyomait vákuumban távolítottuk el.. Ezután a placentotropint tartalmazó nyers csapadékot 5 liter 3,5 pH-jú vizes ecetsavoldatban feloldottuk, és az oldatból a fel nem oldódott lebegő részeket kiszűrtük. A 3,5 pH-jú szüredéket 4 óra hosszat rázattuk Oxycel adszorbenssel (celluronsavakból álló gyapotszerű anyag, 14—15% karboxilcsoportot tartalmaz; készül cellulóznak nitrogéndioxidgázzal való 20—30 órás kezelése útján. Ezalatt a placentotropin adszorbeálódott az Oxycelen. Az adszorbenst szűrqn elválasztottuk a folyadéktól, majd az adszorbensről összesen 2 liter 2 pH-jú vizes sósavval háromszor 2—2 órát rázatva a placentotropint eluáltuk. A 3 eluátumot összeöntöttük, és 0,2 n nátronlúggal 7 pH-ca közömbösítettük. Az így kapott 2 liter oldathoz 2 liter 96%-os etanolt adtunk, és 5 C°-ra lehűtve 24 óra hoszszat állni hagytuk, majd újabb 2 liter 5 C°-ra hűtött etanolt adtunk hozzá, végül 24 órai állás után még 2,8 liter hűtött etanolt. További 24 órai állás után centrifugálással elkülönítettük a finom pelyhes csapadékként kivált, már csak kevés szervetlen szennyezést tartalmazó, egyébként tiszta placentotropint. A terméket kíméletesen, legfeljebb 30 C°-on megszárítottuk, ace\