151935. lajstromszámú szabadalom • Eljárás retroandrosztán-származékok előállítására
151935 közben 28 C°-on 48 óra hosszat szaporodni hagyjuk. Már ilyenkor is bőséges mennyiségű micélium képződik. Mindegyik erjesztőkészülékbe ezután 1,5 g Zl4 ' 6 -9^,10«-pregnadién-3,20--diont (/í6 -retroprogeszteron) teszünk 40 ml acetonban oldva. Az erjesztést az átalakulás lezajlása után megszakítjuk (ebben a kísérletben az egyes adagok reagáltatásához szükséges inkubációs időtartam 2—6 nap volt). A leerjesztett folyadékot a micélium leválasztása után az 1. példában leírt eljárás szerint extraháljuk és feldolgozzuk (az egyes nyersextraktumok az összetétel tekintetében a rétegkromatográfiás vizsgálat szerint nem mutattak eltérést és ezért egyesítettük őket). 10,05 g sárga olajat kapunk, melyet 600 ml szilikagélen kromatografálunk. Eluálószerként 4 : 1 arányú benzol-acetonelegy szolgál. 25 ml-es frakciókat gyűjtünk össze. Az 1—26 frakciók szennyezéseket tartalmaznak. A 28—52 frakciókból metilénklorid-metanol-izopropilénéterelegyből való többszörös átkristályosítás után 495 mg tiszta /H'^/^lOa-androsztadien-3,17-diont kapunk, olvadáspont 192—195 C°. A 90—105 frakciókból metilénklorid-metanoíelegyből és metilénklorid-metanol-izopropiléterelegyből való frakcionált kristályosítással 230 mg tiszta zl4 ' 6 -9/*,10«-androsztadien-17/?-01--3-ont különítünk el, olvadáspont 168—170 C°. E frakciók anyalúgjából további kristályosítással a zla -9^,10ff-tesztolakton izolálható. Olvadáspont: 192—194 C°; A max. (ultraibolya) = 286 m,u; s = 25 000. 3. példa: 10 db 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba az 1. példában megadott összetételű tápoldatból 100— 100 ml-t öntünk, vattadugóval elzárjuk és 120 C°-on 20 percig sterilizáljuk. Ezután a Fusarium solani ferde agarkultúrájából sörcefre agáron kapott spóramicélium-szuszpenzióval beoltjuk. A jó szellőzést biztosító lombikokat forgó rázógépben 24—28 C°-on rázzuk. 66 órás növekedési idő után lombikonként 1 ml acetonban oldott 20 mg J4-9^,10ff-pregnen-3,20-diont (retroprogeszteron) adunk hozzá aszeptikus körülmények között. Az erjesztés vékonyréteg-kromatográfiás ellenőrzése 24, 48 és 96 óra elteltével azt mutatja, hogy az adagolt retroprogeszteron már 24 óra elteltével teljesen A a-9ß,10a-androszten-3,17-dionná épül le. Ugyanehhez az eredményhez jutunk akkor, ha a fentiek szerint járunk el azzal az eltéréssel, hogy 1000 ml vízben 15 g peptont, kukoricalekvár 3 g-nyi szárazmaradékát és 50 mg glukózt tartalmazó tápoldatot használunk és a pH-t nátriumhidroxiddal 6,5-re állítjuk be. 4. példa: 6 liter tápoldatot (15 g pepton, kukoricalekvár 3 g-nyi szárazmaradéka, 50 mg glukóz 1000 ml vízben, pH = 6,5, nátriumhidroxiddal beállítva) habzásgátlószer hozzáadásával kavaróval ellátott és szellőztetett erjesztőkészülékben steril körülmények között Fusarium solani 3 na-5 pos rázott kultúrájával beoltunk. 28 C°-on való 46 órás szaporodás után 1,2 g /l4 -9/?,10a-pregnen-3,20-diont (retroprogeszteront) adunk hozzá, 40 ml acetonban oldva. A leerjesztett folyadékot 48 óra elteltével (végső pH = 4,6) megszűrjük 10 és a szűrletet az 1. példában leírt módon extraháljuk. A nyers extraktumot 60 ml acetonban feloldjuk és melegen 1,2 g aktív szénnel kezeljük. Szűrés és bepárlás után 2,28 g sárga olajat kapunk. Ezt kevés benzolban feloldjuk és 400 15 ml szilikagélen kromatografáljuk. 10 ml-es frakciókat fogunk fel. Az 1—116-os frakciók összesen 780 mg szennyezést tartalmaznak. A 117— 170 frakciók (benzol-2% aceton) 490 mg, rétegkromatográfiailag egységes z)4 -9/í,10a-androsz-20 ten-3,17-diont tartalmaznak. Olvadásponté 155— 156 C° (metilénklorid-izopropil-éterelegyből való többszőri átkristályosítás után); I max. (ultraibolya) = 241 m«; s = 16 500. A 186—244 frakciókból (benzol-acetonelegy 9 : 1) 540 mg egysé-25 ges /Ji-g^lOa-androszten-n^-Ol-S-ont kapunk. Olvadáspont 154—155 C° (metilénklorid-izopropiléter); '• max. (ultraibolya) = 241 m«; e = = 16 000. 30 5. példa: 1,2 g /;J', -9/ ? ,10a'-pregnen-3,20-diont (retroprogeszteron) a 4. példában leírt módon, de az inkubációs idő 7 napra való felemelésével enzi-35 matikus oxidációnak vetünk alá. Ily módon 1,12 g egységes /f4 -9/ ? ,10a-androszten-3,17-diont kapunk (a leérj esztett folyadékból ennél a kísérletnél nem lehetett /l4 -9A,10o:-androszten-17/5--01-3-ont izolálni). 40 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a 17-es szénatomon oxigént tartal-45 mázó retroszteroidok előállítására, azzal jellemezve, hogy a retropregnán-sor valamely 20--oxoszteroidját Fusarium solani segítségével aerób enzimatikus oxidációnak vetjük alá. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganato-50 sítási módja, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként a retropregnán-sor 1,2-helyzetben telített vegyületét használjuk, mely 3- és 20-helyzetben egy-egy oxo-csoportot és 4,5-helyzetben kettős kötést tartalmaz. 55 3. Az 1—2. igénypontok szerinti eljárás foganatosftási módja, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként /14 -9^,l0«-pregnen-3,20-diont használunk. 4. Az 1—2. igénypontok szerinti eljárás foga-60 natosítási módja, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként /14 ' 6 -9A,10a-pregnadien-3,20-diont használunk. 1 rajz, 4 képlet A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 656506. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.
