151916. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mitotikus anyagok előállítására és vizsgálatára

151916 képes-e aktív lét előállítani, tehát kiválaszthassuk a legalkalmasabb törzseket; b) hogy megállapítsuk azt a pillanatot, amikor a tenyészet aktivitása a legnagyobb; c) hogy kipróbáljuk a nyers léből kémiai úton kivont különböző frakciókat annak megállapítására, hogy aktívak-e. Az előzőekben leírt eljárással kapott nyers lé vagy töményített lé minőségét meghatározó, találmány szerinti módszer lényegében abból áll, hogy á vizsgált lével azonos térfogatra egészítjük ki bizonyos számú Petri-csésze tartalmát, amely különböző mennyiségű 1 : 2 arányban hígított L H táptalajból áll, majd mindegyik csészét beoltjuk egy csepp normál próbaalgaszuszpenzióval, a mintákat kellő hőmérsékleten és megvilágítás alatt tartjuk, végül vizsgáljuk a beoltás hatását, hogy megakadályozzuk a lé aktivitását a szuszpenzióban levő sejtek számos osztódásához szükséges idő és koncentráció függvényében. Az inkubációs idő legfeljebb 24 óra, leggyakrabban 15—18 óra, de egyes esetekben 6 órára is csökkenhet. A normál próba-algaszuszpenzió egy Desmidiacea alga, a Cosmarium lundellü var. ellipticus Lefévre törzséből készül, amelyet a Centre National de la Recherche Scientifique algatárában őriznek. Ez az alga az L + C táptalajon vitalitásának csökkenése nélkül osztódik. Célszerű ha itt megemlékezünk ennek az algának némely jellegzetességéről, amelyeken az alább leírt módszer alapul; a Cosmarium elég nagy méretű, hossza 68—75 mikron, vastagsága 53— 55 mikron. Ennélfogva könnyen tanulmányozható a viselkedése tenyészetben már kis nagyítással is, tehát olyan objektívvel, amely lehetővé teszi a vizsgálatot közvetlenül a Petricsészében, 4—5 mm vastag folyadékréteg alatt. Ez az alga osztódással szaporodik. A két félsejt elválik, azonban egy vékony „híddal" kapcsolatban marad egymással. A híd közepén válaszfal jelenik meg. Ebben a pillanatban a két fél önállósul. A „híd" mindegyik oldala önálló növekedésnek indul, és morfológiailag és citológiailag reprodukálja a hozzákapcsolódó másik felet. Az osztódás két és fél óra alatt befejeződik, eredményeként két Cosmarium állt elő. Ezek több órán át érintkezésben maradnak az újonnan kialakuló félsejtekkel, majd különválnak. A próbatenyészetben létrejött osztódások számát így igen könnyű megállapítani, megszámlálva az érintkezésben levő, még el nem vált sejteket. Megállapítottuk, hogy adott idő alatt és meghatározott hőmérsékleti és megvilágítási viszonyok között az osztódások száma közvetlenül összefügg a vizsgált tenyészet levének aktivitásával. A mérések pontossága érdekében a vizsgálatokat állandó hőmérsékleten és állandó megvilágítással végeztük, rendszerint 22—24 C-on és 1200—1500 lux fényerőnél. Ilyen körülmények között az; eredményt 24 vagy 36 óra alatt, sőt gyakran még lényegesen gyorsabban megkaptuk. Gyakorlott vizsgáló a lé aktivitását olykor 5—6 óra alatt meg tudja állapítani. A vizsgálat érzékenysége függ részben a beoltásra használt Cosmarium tenyésztésének 5 módjától; a következő példaként leírt eljárás bizonyult a legjobb eredményt adónak: Tíz cm átmérőjű Petri-csészékben levő L+C táptalajt, amely 0,8% agar-agart tartalmazott, beoltunk Cosmariummal. 10 Amikor a tenyészet élénk szaporodásban van, befedjük kb. 15 ml folyékony steril LtC táptalajjal. A Cosmarium elválik a géltől; az elválást elősegíthetjük a Petri-csésze gyenge rázogatásával, mire a Cosmarium a folyékony L + C 15 táptalajban szuszpendálódik. A szuszpenziót azután kis steril Erlenmeyer-lombikba gyűjtjük, majd L + C táptalajjal addig hígítjuk, amíg egy cseppje kb. 50 Cosmariumot tartalmaz. Az így készült szuszpenzió beoltásra kész. 2o Mintegy 3 napig eláll, ha világosságon tartjuk. Ezután fel kell újítani. Ezzel az algaszuszpenzióval meghatározhatjuk mind a nyers, mind a töményített tenyészetek levének aktivitását. Mindkét esetben a levet 25 előzetesen baktériumszűrőn kell átszűrni. Ezután a következőképpen járhatunk el: a) nyers lé: Három-három 6 cm átmérőjű Petri-csészéből 6 sorozatot állítunk össze. Az 1. sorozatba 9,5 30 ml, kétszer desztillált vízzel kétszeresére hígított L H táptalajt öntünk, a 2. sorozatba 9 ml-t, a 3. sorozatba 8 ml-t, a 4, sorozatba 7 ml-t, az 5. sorozatba 6 ml-t és a 6. sorozatba 5 ml-t. 40 Ezután mindegyik Petri-csészét 10 ml-re töltjük fel a vizsgálni kívánt nyerslével. Kissé mozgatjuk a csészéket, hogy a keveredést elősegítsük. ' Most minden csészét beoltunk egy csepp elő-45 zőleg elkészített normál próba-algaszuszpenzióval, és kitesszük a megvilágításnak kellő hőmérsékleten. b) Töményített lé: Három-három 6 cm átmérőjű Petri-csészéből 50 5 sorozatot állítunk össze, és minden csészébe 10 ml kétszeresére hígított L H táptalajt öntünk. Ezután az 1. sorozat csészéibe 1 csepp tömény lét adunk, 55 a 2. sorozatba 2 cseppet, a 3. sorozatba 4 cseppet, a 4. sorozatba 6 cseppet és az 5. sorozatba 10 cseppet. 60 Beoltás után az előbb ismertetett módon kezeljük. Mind a nyers, mind a töményített lé esetében ellenőrzést végzünk. Három csészébe 10 ml kétszeresére hígított L H táptalajt öntünk, és 65 beoltjuk egy csepp Cosmarium-szuszpenzióval. 4