151916. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mitotikus anyagok előállítására és vizsgálatára

3 151916 4 kalciumnitrát. vas(III)klorid Sphagnum-kivonat kertiföld-kivonat kétszer desztillált víz 100 mg 1 csepp 7,5 ml 7,5 ml 1000 ml ehhez járulnak még nyomelemek a következő alakban és mennyiségben: A legrövidebb idő alatt aktív szűrletet eredményező körülmények megállapítására irányuló kutatásaink során bebizonyosodott, hogy a felhasznált táptalajnak egyedül csak szervetlen sókat kell tartalmaznia, ezek adják a legjobb eredményeket, különösen az alábbi, példaképp felsorolt algákkal: Cynaphyceák, Phormidium, Hormidium, Cylindrospermum fajok, Oscillatoriák, Lyngibiák. N Ezek közül a legelőnyösebbek a hévforrásokból származó Cyanophyceák, a Phormidium uncinatum, ambiguum és cebennense és az Oscillatoria brevis. Ezeknek az algáknak a törzseit letétbe helyeztük a Centre National de la Recherche Scientifique, Párizs algatárában. A tenyésztési folyamat, a találmány egyik tárgya, lényegében abból áll, hogy a törzseknek az L + C táptalajban való elválasztása után egyegy agar-agart tartalmazó, kizárólag szervetlen sós táptalajt beoltunk az említett elkülönített törzsek egyikével, és erősen megvilágítjuk, például izzólámpákkal, előnyösen 1500 és 1800 lux közötti fényerővel, naponta 12—15 óra hosszat, 35 C° körüli hőmérsékleten mindaddig, amíg az algák egyenletesen el nem szaporodtak a táptalajon, majd ugyanazt a kizárólag szervetlen sós táptalajt, előnyösen agar-agar nélkül, beoltjuk az említett algákkal, azonos megvilágítási és hőmérsékleti körülmények között az algatömeg elszaporodásához szükséges ideig, majd pépet készítünk az algatömegből ugyanabban a táptalajban, végül beoltjuk ezzel a péppel a palackokban levő táptalajt. A palackokat napi 15 órán át megvilágítjuk például izzólámpákkal, előnyösen 1500 és 1800 lux közötti fényerővel, miközben a hőmérsékletet 35 C" körül tartjuk, végül steril szűrőre visszük, hogy összegyűjtsük a tenyészetek szűrletét, amely azután töményíthető és liofilezhető. Az egyedül csak szervetlen sókból álló, találmány szerinti táptalaj, amelyet a jövőben „L H táptalajnak" fogunk nevezni, célszerűen a következő,. összetételű: kalciumnítrát 1 g kalciumklorid 0,035 g kalciumszulfát 0,100 g magnéziumszulfát 0,050 g nátriumhidrogénkarbonát 0,100 g magnéziumklorid 0,050 g káliumnitrát 0,075 g dikáliumhidrogénfoszfát 0,300 g nátriumszilikát 0,100 g nátriumnitrát 0,025 g trinátriumfoszfát 0,001 g káliumklorid 0,010 g kétszer desztillál víz 1000 ml 10 vascitrát vasszulfát vas(III) klorid rézszulfát ammóniummolibdát cinkszulfát kobaltklorid mangánnitrát citromsav 3,25 mg 1,25 mg 1,25 mg 0,06 mg 0,12 mg 0,12 mg 0,12 mg 0,12 mg 0,12 mg Az alábbiakban egy példát közlünk a talál-15 mány szerinti eljárás megvalósítására. A szilárd táptalajon létesített első tenyészet esetében az ehhez az L H táptalajhoz adott agar-agar mennyisége előnyösen literenként 8—10 g. A jól lemosott agar-agart forrásban 20 levő vízben oldjuk. Ezt a szilárd táptalajt szétosztjuk lelángolt 10 cm átmérőjű Petri-csészékbe, és behelyezzük az autoklávba. Az (L + C) táptalajon a szokásos módon kapott törzseket bőségesen, kb. 1 ml mennyiség-25 ben használjuk a fejlődés meggyorsítása érdekében beoltásra; a műveletet steril kamrában végezzük. Ezután a csészéket izzólámpákkal 1500—1800 lux fényerővel megvilágítjuk. Ilyen körülmények között az algák a szilárd táptala-30 jon legfeljebb 12—15 nap alatt elszaporodnak. A szilárd táptalajon így tenyésztett algákat elkülöníthetjük dehidratálás céljából ipari vagy egyéb felhasználásra. Ezenkívül a találmány értelmében felhasznál-35 hatjuk az algákat folyékony táptalajra átvíve tömény leveknek gyorsított tenyészetekben való előállítására is. E célból a következőképpen járhatunk el: Vattadugóval elzárt 1500 ml-es Erlenmeyer-40 lombikokat megtoltunk 500 ml L H táptalajjal, és autoklávban sterilizáljuk. A Petri-csészékben szilárd táptalajon előállított tenyészeteket steril körülmények között feldaraboljuk, és szétosztjuk az Erlenmeyer-lombikokba úgy, hogy 45 egy-egy lombikba kb. fél Petri-csészényi tenyészet jusson. Ezután a lombikokat ugyanolyan hőmérsékleten és megvilágítás alatt tartjuk, mint a szilárd táptalajon Petri-csészéket tartottuk. 50 Amikor a enyészet jól kialakult, ami kb. 30 napot vesz igénybe, mikroszkópi vizsgálattal meggyőződünk róla, hogy mentes-e szennyezésektől. A következő lépésben az algatömeget elekt-55 romos diszpergátor segítségével steril kamrában szétoszlatjuk, és L H táptalajt adunk hozzá mindaddig, amíg egy folyékony „pépet" nem kapunk. Ezzel a péppel végezzük el az utolsó beoltást a harmadik lépésben folyékony táp-60 anyagú tenyészet előállítására. Steril 4 literes ún. penicillines lombikokba, amelyeket alább ismertetünk, 1,5 L H táptalajt öntünk, és mindegyik lombikot beoltjuk a második lépésben kapott folyékony pépből 50 65 ml-rel. 2