151797. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftacén-származékok biológiai átalakítására a tetraciklin-sorozatba tartozó antibiotikus hatású vegyületekké

151797 9 10 ATCC 10762a törzs felhasználásával. A 3. példában leírt módon jártunk el az alábbi eltérésekkel: A Streptomyces aureofaciens ATCC 10762a törzs spóráit alkalmaztuk az NRRL 3013 törzs helyett. A részlegesen fermentált levet oly lombikokba vittük át, amelyek 11 mg 6-metil-pretetramidot tartalmaztak 10 ing magnéziumacetát és 1 ml dimetilszulfoxid elegyében oldott állapotban. A fermentációt azután további 96 óra hosszat folytattuk a forgó rázóberendezésben 28 C° hőmérsékleten. Ezután elemzésnek vetettük alá a fermentációs levet, amikoris 265 mcg/ml 7-klór-tetraciklin jelenlétét állapítottuk meg. A ponosan ugyanilyen módon, de a 6-metil-pretetramid elhagyásával lefolytatott ellenőrző fermentáció kísérlet során nem találtunk 7-klór-tetracikIint a fermentációs termékben. 5. példa: A 6-metilpretetramid biológiai átalakítása tetraciklinné Streptomyces aureofaciens NRRL 3014 törzs felhasználásával. A 4. példában leírthoz hasonló módon jártunk el, csupán azzal az eltéréssel, hogy az ATTC 10762a törzs helyett a S. aureofaciens NRRL 3014 nem-klórozó törzs spóráit alkalmaztuk. A részlegesen fermentált levet oly lombikokba vittük át, amelyek 11 mg 6-metil-pretetramidot tartalmaztak 10 mg magnéziumacetát és 1 ml dimetilszulfoxid elegyében oldva. A fermentációt azután forgó rázóberendezésben további 96 óra hosszat folytattuk 28 C° hőmérsékleten. A fermentációs lé ezután lefolytatott analízise során 108 mcg/ml tetraciklin volt kimutatható. Az ugyanilyen módon, de a 6-metil-pretetramid elhagyásával lefolytatott ellenőrző kísérlet során a fermentációs termékben tetraciklin jelenléte nem volt kimutatható. 6. példa: A 6-metil-pretetramid biológiai átalakítása oxitetraciklinné Streptomyces hygroscopicus NRRL 3015 törzs felhasználásával. A 3. példában leírthoz hasonló módon jártunk el, az alábbi eltérésekkel: Egy talajból elkülönített és Streptomyces hygroscopicus NRRL 3015 törzsként azonosított kultúra spóráit alkalmaztuk az NRRL 3013 törzs spórái helyett. A 28 C° hőmérsékleten részlegesen fermentált levet oly lombikokba vittük át, amelyek 10 mg 6-metil-pretetramidot tartalmaztak 10 mg magnéziumacetát és 1 ml dimetilszulfoxid elegyében oldott állapotban. A fermentációt azután forgó rázóberendezésben további 96 óra hosszat folytattuk 34 C° hőmérsékleten. A fermentációs lé ezután lefolytatott elemzése azt mutatta, hogy a jelenlevő oxitetraciklin mennyisége lényegesen nagyobb, mint az ellenőrző kísérlet során 6-metil-pretetramid hozzáadása nélkül, egyébként azonos körülmények között kapott fermentációs termékben. 7. példa: A 6-metil-pretetramid biológiai átalakítása oxitetraciklinné Streptomyces rimosus NRRL 2234 törzs felhasználásával. A 6. példában leírthoz hasonló módon dolgoztunk, csupán azzal az eltéréssel, hogy a Streptomyces hygroscopicus NRRL 3015 törzs helyett a S. rimosus NRRL 2234 törzs spóráit alkalmaztuk. A fermentáció befejezte után a fermentációs termék elemzése azt mutatta, hogy az oxitetraciklin jelenlevő mennyisége lényegesen nagyobb, mint az ugyanilyen módon, de a 6--metil-pretetramid elhagyásával lefolytatott ellenőrző kísérlet fermentációs termékében. 8. példa: A 4-dimetilamine-6-meiil-pretetramid biológiai átalakítása tetraciklinné Streptomyces aureofaciens NRRL 3014 törzs felhasználásával. A nem-klórozó Streptomyces aureofaciens NRRL 3014 törzs ferde ágáros kultúrájáról a spórákat desztillált vízzel lemostuk és így olyan spóra-szuszpenziót készítettünk, amely ml-enként 60—80 X106 spórát tartalmazott. Ebből a szuszpenzióból 0,33 ml mennyiséget oltottunk egy kb. 20 cm-es kémcsőben elhelyezett, 8 ml térfogatú inokulum-táptalajra. A táptalaj összetétele és az inkubáció módja teljesen megegyezett az 1. példában leírttal. Az így kapott S. aureofaciens inokulum-kultúrával azután egy oly fermentációs táptalajt oltottunk be, amely pontosan az 1. példában leírt módon volt elkészítve. Ezt a táptalajt sterilizálás után 25 mles adagokban 250 ml-es Erlenmeyer-lombikokba vittük és a S. aureofaciens inokulum-kultúra. 1 ml-es adagjaival oltottuk be a lombikok tartalmát. A fermentációt percenként 180 fordulatot végző forgó rázóberendezésben 24 óra hosszat folytattuk 25 C° hőmérsékleten. Ezután a fermentációs lé mindegyik adagját külön-külön egy-egy oly lombikba vittük át, amely 10 mg 4-dimetílamino-6-metil-prctetramid 1 ml dimetilszulfoxiddal készített oldatát tartalmazta. A fermentációt a forgó rázóberendezésben további 96 óra hosszat folytattuk 25 C° hőmérsékleten. Ezután a fermentációs levet biológiai elemzésnek vetettük alá; 25 mcg/ml tetraciklin jelenlétét mutattuk ki. A pontosan ugyanilyen módon, de a 4-dimetilamino-6-metil-pretetramid elhagyásával lefolytatott ellenőrző kísérlet fermentációs termékében tetraciklin jelenléte nem volt kimutatható. 9. példa: A 4-dimetilamino-6-metil-pretetramid biológiai átalakítása 7-klór-tetraciklinné Streptomyces aureofaciens NRRL 3013 törzs alkalmazásával. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5