151724. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szaprofita kulturában anyarozs alkaloidokat termelő Clavicepstörzsek szelektálására és fenntartására

151724 8 A nagyszámú fehér, alkaloidot nem termelő telep mellől a színes telepeket kiválasztva, azokat hasonló összetételű ferde agárra szélesztjük. A hét napos tenyészeteket lemosva a következő folyékony táptalajra oltjuk át: szacharóz 5,0 % borostyánkősav 0,2 % glicin 0,5 % KH2PO4 0,05 % CaCl2 0,05 % MgS04 0,025% FeS04 0,025% pH ammónium hidroxiddal 5,2-re állítva. Két napos rázott tenyészetekből homogenizálás és hígítás után a szélesztést ismételjük. A harmadik szélesztés után, amikor fehér telepeket már nem találunk, a ferde agárról 1% szacharózt, 1% sikérkivonatot, 2% agar-agart és sókat tartalmazó táptalajra oltunk, a tenyészetet 9. napon lemosva vásznon szűrjük és a főként konidiumokat tartalmazó szuszpenzióból olyan hígítást készítünk, hogy szélesztéskor agarlemezenként 2—5 konidiumot kapjunk. A fejlődésnek induló izolált telepeket mikroszkóp alatt a 4. napon levesszük és differenciáló ferde agárra oltjuk át. A pigmenttermelés alapján ellenőrzött egykonidium tenyészetet glicin tartalmú táptalajon tartjuk fenn, hetenkénti sorozatos átoltással. A rázottkultúrából 6 literes, majd 200 literes levegőztetett fermentort oltva a 6. napon elért alkaloidszint — a nem specifikus van Urk színreakció szerint — 54Ö* gamma/ml; az egyes alkaloidfajtákat specifikus rétegkrornatográfiával szétválasztva és tropeolin 000 reagenssel meghatározva (V. Biok. Konf. 1963.) 210 gamma/ml alkaloidértéket találunk. Utóbbi értéknek a 60%-a ergotoxin és ergometrin kristály formájában ténylegesen kipreparálható. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás anyarozs alkaloidokat szaprofita kultúrában termelő törzsek kitenyésztésére és 10 fenntartására azzal jellemezve, hogy a kiindulásul szolgáló vad vagy mutagen behatásokkal kezelt Claviceps-tenyészetet szénforrásként kizárólag vagy túlnyomórészt poliszacharidokat, továbbá K és PO< ionokat tartalmazó differen-15 ciáló táptalajon ismételten szélesztjük, az agarlemezről a narancslila színeződést mutató telepeket kiválasztva ezeket az egyes szélesztések között folyékony táptalajon rázott kultúrában szaporítjuk, majd az ily módon kiszelektált 20 alkaloidtermelő kultúrát 0,01—3,0% glicint tartalmazó folyékony táptalajon tenyésztjük tovább, ill. tartjuk fenn. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja azzal jellemezve, hogy a szélesztéshez 25 alkalmazott differenciáló táptalaj pH-ját 6,5 feletti értékre, célszerűen pH 6,8-ra állítjuk be. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja azzal jellemezve, hogy az egyes szélesztések között az egytelep tenyészetek elszaporí-30 tására glicint is tartalmazó folyékony táptalajt alkalmazunk. 4. Az 1—3. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja azzal jellemezve, hogy a termelő törzsként kiszelektált egytelep-tenyészetet szerves 35. nitrogénforrást tartalmazó természetes táptalajadalék mellett konidiumképzésre bírjuk és a törzs további fenntartásához, önmagában ismert módon, egykonidium-tenyészetet állítunk elő. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 653872. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 4