151527. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag hatékony cianokobalamin-monokarbonsav előállítására

151527 likáltan, származékokat készít s ezeket választja el [Acta Haemait, 24, 9 ,{1960)]. Ismeretes még az elválasztásra, illetve a biológiailag hatékony monokarbonsav izomer izolálására olyan eljárás is, amely kieselguhron történő 5 megoszlásos, kromatográfiát alkalmaz. (E. L. Smith előadása a 2. Európai B^-vitamin Szimpóziumon, Hamburg 1961. F. 'Erike Verl. Stuttgart, 1962). Ez, az eljárás (hosszadalmas és nagy veszteségekkel jár. 10 Vizsgálataink során arra a meglepő felismerésre jutottunk, hogy a biológiailag hatékony cianiOkobalamin-monokarbon'Siav egyszerűen és jól előállítható a B12-vitamin savas hidrolízisének ismert módon frakciókra bontott reakció- 15 elegye azon frakciója szárazra párolt mariadékából, mely elektroforetikusan vizsgálva csak a monokarbonsiav izomereket tartalmiazzia vagy a Bi2-vita:mi:n ugyanazon izomereket tartalmazó feldolgozási melléktermékeinek száraz maradé- 20 kából, annak vízből történő egyszeri vagy ismételt kristályosításával. E meglepő felismeréshez az az általunk először észlelt jelenség vezetett, hogy a három, izomer tianokobalaminmonakarboinsav közül szobahőfokon a biológiai- 25 lag hatékony vízben viszonylag rosszul, a másik két izomer viszont jól oldódik. Így vizes kristályosításnál a hatástalan izomerek az anyalúgban maradnak, a biológiailag hatékony cianokobialamin-monokarbonsav pedig a vizes 30 oldatból kiválik. A találmány szerinti eljárás az ismert elválasztási eljárásokkal szemben lényegesen egyszerűbb kivitelezhetőség mellett kevésbé veszteségteljes és jó tisztaságú terméket szolgáltat, 35 Eljárásunk kivitelezését a következő példák szemléltetik: 1. példa: 40 Ciano'koibalamin savas hidrolízise ismert módon frakcióikra bontott raakcióelegyének megfelelő frakcióját elektroforézissel vizsgáltuk, majd az egységes, csak cianokobalamin^monokarbonsav izomereket tartalmazó frakciót szá- 45 razra pároltuk. A száraz maradékból 100 mg-ot 1—1,5 ml desztillált vízben forralással oldottunk, majd iá forró oldatot másnapig szobahőfokon állni hagytuk. A kivált kristályokat szűrtük, hideg vízzel mostuk és vákuumban szárítottuk. 48 mg papír-kromatográfiásán egységes biológiailag hatékony ciianokobalaminmonokarbonsavat nyertünk. Tekintve, hogy a papírkromatográíiás vizsgálatok szerint a frakció teljes monokarbonsiav tartalmának 60%-át képviselte a hatékony izomer, a termelés 80%. Amennyiben a termék papírkromatográfiás vizsgálat alapján még nyomokban a hatástalan izomereket tartalmiazzia, úgy azoktól a fentebb leírt vizes kristályosítás megismétlésével megtisztítható. Ilyen esetben általában egy újabb kristályosítás biztosítja a termék papírkromatográfiás tisztaságát. 2. példa: Az 1. sz. példában leírtaik szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy kiindulási anyagként a cianokobalamin-feldolgozás, melléktermékeként ismert úton nyert, csak, az, izomer rnonokarbonsavakiart tartalmazó frakciót használjuk. Ez esetben az 1. sz. példában leírttal ikonos termelést kapunk. Szabadalmi igénypont: Eljárás biológiailag hatékony ciánokobalaminmo nokasrb o nsav előállítására ci anokob alamin savas hidrolízisének ismert módon frakciókra bontott reakcióelegye azon frakciója szárazra párolt maradékából, amely elektroforetikusan vizsgálva csak a cianokobalamin-monokarbonsav izomereket tartalmazza, vagy a ciamoko'baiamin ugyanezen izomereket tartalmazó feldolgozási melléktermékeinek száraz maradékából, szelektív kristályosítással, melyre jellemző, hogy a száraz, maradékot 5—15-szörös menynyiségű desztillált vízben forralással oldjuk, az oldatot szobahőfokon állni hagyjuk, a kivált kristályokat szűrjük, hideg desztillált vízzel mossuk, szárítjuk és szükség esetén a termék vizes kristályosítását mindaddig megismételjük míg a kapott anyag papírkromatográfiás vizsgálattal egységesnek mutatkozik. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 653152. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23; 3