151389. lajstromszámú szabadalom • Eljárás C-cephalosporin-származékok előállítására

9 151389 10 így tehát a 7-íeniiacetaiTiido-cephalosporánsav a cítrus-acetileszteráz enzim hatására egy olyan termékké alakul át, amely piridinnei a i'enti feltételek mellett nem ad C^-eephalosporin-típusú származékot, ami megerősíti azt a tényt, hogy dezaoetil-vegyület képződött. Ez az új anyag 7-fenilacetamido-cephalosporánsavhoz hasonló módon vándorol és nagy aktivitást mutat staphylococcusok ellen, ez az aktivitás azonban nem olyan nagy, mint a 7-íenilaectamidocephalosporánsavé. 5, példa: 1 mg 7-amido-eephalosporánsavat 0,1 mi 0,1 mólos 7,0 pH-értékű foszfát-tompítóoldatban oldunk. Ennek az oldatnak egy 0,01 ml-es mintáját 0,01 ml vízzel elegyítjük és ezt az oldatot használjuk fel összehasonlító 'mintaként. A 7-amido-eephalosporánsav-oldat fennmaradó 0,09 ml-nyi részét 0,09 ml 7,0 pH-értékre beállított citrus-acetileszteráz oldattal elegyítjük. Ezt az elegyet, valamint az összehasonlító muntát 1,5 óra hosszat 30 C° hőmérsékleten tartjuk. Mindkét oldatból 0,006 ml-nyi mintákat Whatman 1 sz. papírra viszünk és a papírt enyhén bepermetezzük 7,0 pH-értékű mólos piridinacetát-oldattal, éjjelen át piridin acetát-gőz légkörben felfüggesztve tartjuk, majd levegőn megszárítjuk. További 0,005 ml-nyi mintákat viszünk fel papírral mind a vizsgálandó elegyből, mind az összehasonlító oldatból és ezt a papírlapot éjjelen át a laboratóriumi légkörben hagyjuk. Ezután mind a piridinnel kezelt, mind a kezeletlen papírt elektroforézisnek vetjük alá, 14 V/cm potenciálkülönbséggel, 4,5 pH-értékű tompítóoldatban, 2,5 óra hosszat. A molekulamagnak megfelelő szerkezetű vegyületeket ezután a papíron fenilaoetilkloriddal a korábban leírt módon fenilacetilezzük. Az aktív fenilacetilezett anyag foltjait azután Staphylococcus aureus .'(Oxford-törzs) mikroorganizmussal végzett bioautográfiai módszerrel mutatjuk ki a papíron. Az alábbi eredményeket kapjuk: 1. A 7-amido-cephalosporánsav nagy aktív foltot képez, amely 3,4 cm-t vándorol az anód felé. 2. A 7-amido-cephalosporánsav aeetileszteráz-enzknmel adott reakcióterméke valamivel kisebb foltot képez, amely 3,6 cm-t vándorol a anód felé. 3. A 7-amino-oephalosporánsav piridinnei képezett reakcióterméke ugyancsak nagyméretű aktív foltot képez, amelynek az aktivitása a jelenlevő CA-cephalosporin^(piridin) molekulamag-vegyülettől származik; ez a vegyület 3 cm-t vándorol az anód felé. 4. A 7-amino-cephalosporánsav acetileszteráz-enzimmel és azután piridinnel képezett reakcióterméke csupán nyomnak megfelelő foltot mutat, amely a katód felé vándorol. így tehát az aeeti'leszteráz-enzim hatására a 7-amino-cephalosporánsav egy aktív vegyületté alakul át, amely magához a 7-amino-cephalosporánsavhoz hasonlóan vándorol a 4,5 pll-értéken végzett elektroíorézis során; ez a vegyület azonban nem reagál piridinnei és így nem ad a C/\-cephalosporinhO'Z hasonló típusú aktív terméket. Ez a tény azt mutatja, hogy a reakció során dezaoetil-7-a.mino-cephalosporánsav képződött. A. dezacet:il-7-amino-cephalo3poránsav átalakítható e sav N-acilszármazékaivá is, a 150.979 sz. magyal' szabadalom leírásában a 7-amino-cephaiosporánsav aeilezésére leírt módszerekhez hasonló eljárások útján. A jelen találmány szerinti eljárás során természetesen lényeges az, hogy a cephalosporin molekulamag szerkezetét és sztereó-konfigurációját ne bontsuk meg, mert ezzel az antibiotikus aaktivitást is megszüntetnők. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a '{111) általános képletnek megfelelő szerkezetű vegyületeknek — e képletben R hidrogénatomot vagy valamely N-acilcsoportot jelent — valamint e(

vegyületek sóinak az előállítására, azzal jellemezve, hogy a I(1V) általános képletnek megfelelő szerkezetű vegyületeknek — e képletben R hidrogénatomot vagy N-acil csoportot jelent — vagy ezek oldható sóinak az aceiilcsoportját erre alkalmas enzimek segítségével végzett hidrolízis útján eltávolítjuk, majd adott esetben a nyert vegyületeket sókká alakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a (III) általános képletű vegyület nátrium-, kálium- vagy ammóniumsóját állítjuk elő, az 1. igénypont szerint kapott termék valamely nátrium-, káliumvagy animóniumsóval való reagáltatása útján. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti fa járás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy enzimként eitrusaeetileszteráz enzimet alkalmazunk. 4. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy oly i(IV) általános képletű vegyületből indulunk ki, amelynek képletében R a RÍ \ OH • CO— / R2 szerkezetű csoportot képvisel, ahol Rj és R? hidrogénatomot, alkilcsoportot, fenilcsoportot 55 vagy egy R3

—O— szerkezetű csoportot jelent, mely utóbbiban R3 alkilcsoportot, fenilcsoportot vagy helyettesített fenilcsoportot képvisel, :mimellett Rj és R2 helyén egyenlő vagy egymástól különböző csoportok állhatnak. 00 5. A 4. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy oly vegyületből indulunk ki, amelynek képletében Rí fenilcsoportot, R2

pedig hidrogénatomot képvisel. 6. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti 65 eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy 15 20 25 30 35 40 45 50 55 G0 5