151223. lajstromszámú szabadalom • Kataláz előállítása mikroorganizmusokból B12-vitamin melléktermékeként
151223 Ilyen módon a B^-vitamin, ill. annak hidroxoformája csaknem teljes egészében oldatba megy és ez az oldat az ismert módszerek bármelyikével tovább dolgozható fel B12-vitaminra. Az üledék viszont a fermentációs lé katalázaktivitásának 80—90%-át tartalmazza. Ezt az anyagot 40 C°-ot meg nem haladó hőmérsék-. léten megszárítva és porítva olyan készítményhez jutunk, amely grammonként 50—8'0 Bak éregységnyi kataláz aktivitást mutat. (A Bakeregység meghatározását lásd: Enzymológia, I960., 22., 194—200 oldal). Ez az enzim-készítmény számos célra ebben a formában is felhasználható, ha pedig tisztább vagy koncentráltabb készítményre van szükség, az ismert módszerek segítségével tisztítható és koncentrálható. Azon felismerés alapján, hogy a dezinficiáló szerek közül a formalin kis koncentrációban nem hat károsan a katalázra, célszerű a készítményhez a feldolgozás bármely fázisában 1—2 ezrelék formaiint hozzáadni i(40%-os formaldehis-oldatot), annak konzerválása céljából. Példa: 4% glukózt és 2% kukuricalekvár-szárazanyagot tartalmazó táptalajon Propionibacterium shermaniit tenyésztünk 28 C° hőmérsékleten és a pH-t naponta egyszer 7—7,2-re állítjuk NH40'H oldattal. A 8 napos tenyészet 8,3 /'g/ml B12 -vitamin-akti vitást és 1,8 Baker --E/ml kataláz-aktivitást mutat. Ekkor a fermentációs lé pH-ját NH4 OH-val pH 8,2-re állítjuk és a kiváló csapadékot, amely a baktériumokat is magában foglalja, leszűrjük. A csapadékot kevés ammóniával meglúgosított vízzel átmossuk és aztán azonos térfogatnyi vízzel alaposan elkeverjük, majd annyi etanolt adunk hozzá, hogy az oldat etanol-koncentrációja 35%-os legyen. Az elegyet mechanikus keverővel 2 órán át keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. Másnap reggel az elegyet centrifugáljuk, az üledéket azonos térfogatú 30%-os etanollal kétszer kivonjuk, mindkét esetben 30 percig keverve az anyagot és eentrifugálással elkülönítve a folyadékot az üledéktől. A leszűrt oldatokat egyesítjük és vákuumban az 1/3 részére bepároljuk. Az így nyert vizes koncentrátum kissé 5 barnás árnyalatú piros oldat, amely az eredeti B12 -vitamin-aktivitás 86%-át tartalmazza. A csapadékot 35 C°-os szárítószekrénybe helyezzük, miután nedves súlyára számítva 1 ezrelék 40%-ois formalin-oldattal elkevertük. A meg-10 száradt anyagot porítjuk és finom szitán átszitáljuk. Az így nyert készítmény a kiindulási anyag 2,7%-át teszi ki és grammonként 56 Baker-egységnyi kataláz-aktivitás mutatható ki benne. A készítmény szobahőmérsékleten 15 tartva hosszú ideig megőrzi aktivitását. Szabadalmi igénypontok: 20 25 30 35 40 45 1. Eljárás kataláztartalmú készítmény előállítására a Bi2-vitamin gyártásánál visszamaradó mikroorganizmus-tömegből, amelyre jellemző, hogy előbb a B12 -vitamint vonjuk ki belőle 40 C°-ot meg nem haladó hőmérsékleten, 20— 40%-os —• vízben jól oldódó alkoholokat vagy ketonokat tartalmazó vizes oldattal, ami által a kataláz inaktiválását elkerüljük, majd a maradékot 40 C°-ot meg nem haladó hőmérsékleten megszárítjuk és porítjuk. 2. Az 1. igénypontban vázolt eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy kiindulási anyagnak a Propionibacterium családhoz tartozó mikroorganizmusok tenyészetét használjuk. 3. Az 1. és 2. igénypontban vázolt eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy a Bj2 vitamin kivonására metanol, etanolí, propanol, izopropanol, aceton vagy metiletilketon vizes oldatát használjuk. 4. Az 1. és 2. igénypontban vázolt eljárás kiviteli módja, amelyre jellemző, hogy a kapott kataláz-készítményt 1—5 ezrelék formaimnál konzerváljuk olyan módon, hogy nevezett konzerválóanyagot a még nedves péppel elkeverjük és azután szárítjuk meg. Figyelembe vett nyomtatványok: USP 2 764 521, 2 595 ISO, 2 793 161, 2 695 862, 2 677 644, DBP 1 037 066. Á kiadásért felel: a közgazdasági és Jogi könyvkiadó igazgatója. 642757 Zrínyi (T) Nyomda, Budapest, V., Balassi Bálint utea 21—23, 2
