151218. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
21 151218 22 237—239°-on olvadó kristályos terméket szolgáltat (nincs azonosítva). A 2—6. frakció (4,15 g, eluálva kloroformmal) éter és petroléter elegyéből kristályosítva 00 mg kristályos B-roridint ad, 139—143°-on olvadó tűkristályok alakjában. A 7—10.. frakció (eluálva 99:1 arányú kloroform-metanol eleggyel) 1,09 g amorf anyagot ad (kiselejtezve). A 11—18. frakcióból (3,25 g, eluálva 98:2 kloroform-metanol elegygyei) éteres kristályosítással 2,18 g nyers kristályos A-verrukarint kapunk, amely még B-verrukarint is tartalmaz. A további frakciókat kiselejtezzük. 12. példa: A-verrukarin, B-verrukarin és D-verrukarin előállítása és elkülönítése Az S 833 törzset az 1. példában leírthoz hasonló módon rázott kultúrában inkubáltatjuk olyan tápoldatban, amely literenként 30 g szacharózt. 2,5 g ammóniumkloridot, 1,0 g primer káliumfoszfátot, 0,5 g magnéziumszulí'átot (•7H2 0), 0,5 g 'káliumkloridot, 0,01 g vasszulfátot (-7H2 0) és vizet tartalmaz. 900 ml fermentlevet 2 liter etilacetáttal extrahálunk. Az etilacetátos oldatot vízzel, majd 2 n nátriumhidroxidoldattal, azután ismét vízzel mossuk és vákuum alatt bepároljuk. 243 mg olajszerű nyers terméket kapunk, ezt 12 g szilikagélen kromatografáljuk. A kloroformmal eluált frakciókból, éter és petroléter élegyéből kristályosítva, 2 mg tiszta D-verrukarint kapunk, 127— 128°-on olvadó tűkristályok alakjában. A vékony rétegű kromatografálás során a D-verrukarin kb. ugyanolyan sebességgel vándorol, mint az A-verrukarin. A következő, 99:1 arányú kloroform-metanol eleggyel eluált frakciókból 38 mg nyers kristályos A-verrukarint kapunk, amely még B-verrukarint is tartalmaz. 13. példa: A nyers (B-verrukarint tartalmazó) kristályos A-verrukarin szétválasztása tiszta A-verrukarinra és B-verrukarinrá 9.53 g nyers (B-verrukarint tartalmazó) kris-10 15 20 25 30 35 40 45 tályos A-verrukarint 5,4 kg 1:1 arányú kovaföld-víz keveréken megoszlásos kromatográfiának vetünk alá. Eluálásra frakciónként 1,2 liter oldószert alkalmazunk, vízzel telített állapotban. Az 1—20. frakcióból (eluálva benzollal és 95:5 arányú benzol-kloroform eleggyel) 445 mg olajos anyagot kapunk (kiselejtezve). A 21—34. frakció (1,20 g, eluálva 95:5 arányú benzol-kloroform eleggyel) aceton és éter élegyéből kristályosítva 747 mg tiszta kristályos B-verrukarint ad, amely vékony rétegű kromatografálással egységes anyagnak mutatkozik. A 35—37. frakció (172 mg, eluálva 95:5 benzol-kloroform eleggyel) aceton és éter élegyéből kristályosítva 126 mg kristályelegyet szolgáltat, amely kb. 50% A-verrukarinból és kb. 50% B-verrukarinból áll. A 38—40. frakcióból (eluálva 95:5 arányú benzol-kloroform eleggyel) 408 mg anyagot kapunk, amely túlnyomórészt A-verrukarinból (főtermék) és 3—4 további, nem azonosított melléktermékből áll. A 41—84. frakció (8,6 g, eluálva 9:1, 8:2, 3:2 és 7:3 arányú benzol-kloroform elegyekkel és kloroformmal) aceton és éter élegyéből kristályosítva 6,13 g tiszta kristáyos A-verrukarint ad, amely a vékonyrétegű kromatografálás során egységesnek bizonyul. 14. példa: A verrukarinok és roridinek vékony rétegű kromatográf álása A verrukarinok és roridinok vékony rétegű kromatografálását az ismert módszerekkel végeztük. A kapott R/-értékeket az alábbi táblázatban foglaltuk össze. A táblázatban az R/értékek három oszlopa az alábbi hordozóanyaggal ill. oldószerelegyekkel kapott értékeket mutatja: 1) Hordozó: alumíniumoxid futtató oldószerelegy: kloroform-metanol 98 :2 2) Hordozó: szilikagél futtató oldószerelegy: 98 :2 3) Hordozó: szilikagél futtató oldószerelegy: 97 :3 kloroform-metanol kloroform-metanol R/-értékek: Anyag 1) R/-értékek 2) 3) színreakció jóddal szín ibolyántúli fényben verrukarin A 0,70 0,28 0,59 sárgásbarna Világos verrukarin B 0,83 0,47 0,69 sárgásbarna * világos verrukarin C 0,74 0,28 0,59 sárgásbarna világos, fénylő verrukarin D 0,70 0,28 0,59 sárgásbarna sötét verrukarin E — — 0,91 ibolya sötét roridin A 0,70 0,18 0,55 sárgásbarna sötét roridin B 0,55 0,36 0,41 zöldesfekete sötét roridin C — — 0,42 sárgásbarna SÖtét 11
