151019. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kobalaminok előállítására
151019 6 20 oltjuk be és az erjesztést is az 1. példában megadott módon vezetjük le. A 8. napon a tenyészetben 4,2 /'g/ml B12 -vitamint és 0,76 Mg/ml Kobalamin-monokarbonsavat találunk. A tenyészethez ekkor 4% technikai NH4 OH oldatot adunk. Pelyhes csapadék képződik, amely 6 óra alatt az eredeti térfogat y4 részére ülepszik, a felülúszó rész enyhén opálos, 0,15 /'g/ml B12 -vitamint tartalmaz. Az üledéket szűrőpapíron szűrve majdnem éles szűrletet kapunk, míg a baktériummassza a szűrőpapíron marad. 3. Az 1. példában megadott táptalajt 5% Propionibacterium petersonii-tenyészettel oltjuk be és ugyanúgy vezetjük az erjesztést, mint ahogy ott leírtuk. A 8. napon 5,2 /'g/ml B12-vitamint találunk a fermentációs lében. 1% NaOH-t adunk a fermentációs folyadékhoz, mire pelyhes csapadék válik ki, a felülúszó folyadék pedig teljesen éles. 2—3 percnyi kevergetés után 2%-nyi 50%-os (NH^SCVoldatot adunk hozzá a tenyészethez, mire a pH 8,7-re áll vissza. Ez a folyadék ülepedéskor teljesen éles felülúszó oldatot ad, a csapadék pedig könnyen centrifugálható. 10 liter fermentléből 200 ml centrifugált üledéket kapunk. További kon- 25 centrálás és tisztítás végett 20% súlyszázalék konyhasót adunk az üledékhez, mire a csapadék levet ereszt és elfolyósodik. 2 órai állás után centrifugálva a csapadékról közel 100 ml (50%) sárga folyadékot öntünk le, amely csak 30 halvány nyomokban tartalmaz B12 -vitamint, míg a csapadék tömege a felére csökken, B12 vitamintkoncentrációja pedig a kétszeresére emelkedik. 4. Az 1. példában megadott táptalajt (400 ml-t) beoltjuk 10 ml P. shermanii-oltóanyaggal. 72 óra múlva félfolyamatos tenyésztést kezdünk oly módon, hogy a tenyészet felét kivesszük és azonos összetételű friss táptalajjal pótoljuk. Ezt a műveletet naponta megismételjük. A kivett tenyészetet (200 ml-t) a leírt táptalaj 400 ml-ével összekeverve nyitott edényben erjesztjük tovább 3 napig. A 2. napon 2 jug/ml 5,6 dimttilbenzimidazolt adunk a tenyészethez. Az oldatban 4,7 Mg/ml B12 -vitamin 45 mutatható ki. Az oldat pH-ját Na2 CO s oldattal pH 8-ra állítjuk. Pelyhes csapadék keletkezik, amely a baktériumtömeget magával ragadja, míg az oldat éles, baktériummentes. A csapadék feldolgozása az előbbi példákban leírt módok 53 valamelyikével történhet. 5. Az 1. példában megadott táptalajt készítjük el azzal a különbséggel, hogy kukorica-35 40 lekvár helyett a következő módon készült kukoricalekvár-kivonatot adjuk hozzá olyan mennyiségben, amely 0,5% kukoricalekvár feldolgozásából nyerhető: 1 súlyrész kukoricalekvárhoz annyi metanolt, ill. vizet adunk, hogy 1 súlyrész kukoricalekvárszárazanyagra 2 térfogatrész 50%-os metanol essék (számításba véve a kukcricalekvár nedvességtartalmát). Alaposan összekeverjük, majd leszűrjük. A maradékot még kevés 50%-os metanollal mossuk. A nyert oldatról a metanolt ledesztilláljuk és a maradékot adjuk hozzá a jelzett mennyiségben a többi táptalajkomponenshez. 1 liter ilyen módon készült táptalajt beoltunk 100 ml azonos összetételű P. freudenreichii tenyészettel. Öt nap elteltével 2 Mg/ml 5,6-dimetilbenzimidazolt adunk a tenyészethez és még 2 napig tovább fermentáljuk 27—28 C°-on. 6 /xg/ml B12 -viiamin mutatható ki a tenyészetben. 2% mennyiségben 25%-os ammóniumhidroxiddal meglúgosítva, pelyhes csapadék válik ki a fermentációs léből, amely gyorsan ülepszik, míg a felülúszó teljesen átlátszóvá válik. A csapadékot 6 órai állás után Büchnertölcséren szűrőpapíron szűrjük, az átfolyó oldat éles, B12-vitamint csak halvány nyomokban tartalmaz. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás kobalaminok előállítására Propionibacteriumok fermentációja útján, amelyre jellemző, hogy a fermentációhoz kolloidszegény táptalajt alkalmazunk, amely 0,25—0,5% kukoricalekvár szárazanyagot vagy 1% kukoricalekvár szárazanyagnak megfelelő fehérjementes kukoricalekvár-extraktumot tartalmaz. 2. Az 1. igénypontban ismertetett eljárás foganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy a táptalajban alkalmazott kukoricalekvár-extraktumot kukoricalekvár vízoldható szerves oldószerrel való extrakció jávai állítjuk elő. 3. Az 1. igénypontban ismertetett eljárás foganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy a kukoricalekvár-extraktumot úgy állítjuk elő, hogy a kukoricalekvárt vízzel hígítjuk, majd a fehérjeanyagokat kisózzuk. 4. A 3. igénypontban ismertetett eljárás fo-r ganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy kisózáshoz olyan anyagokat alkalmazunk, amelyek a fermentáció szempontjából biológiailag kívánatosak, előnyösen ammóniumszulfátot. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 642389 Zrínyi (T) Nyomda, Budapest, V., Balassi Bálint utca 21—23.
