150631. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergometrin, ergokriptin és ergokornin termelésére szaprofita kultúrában
2 150.631 kakaóbarna színű, erősen gyűrődött felületű, fonákja sötét kakaóbarna. A felületen kevés porszerű konidium látható, a mieélium nem vattás, konidiumtartók nem láthatók. A 10 700 r sugár-adaggal történő besugárzás útján nyert és szelektált, szaprofita alkaloidterrnelésre képes új törzs fenntartása oly módon történik, hogy a szénforrásként szaccharózt, nitrogénforrásként ammóniuraszukcinátot, továbbá különféle szervetlen sókat tartalmazó, agárral szilárdított, táptalajon tenyésztett kb. 30 napos felületi kultúrát fémszitán átpasszírozva, hasonló összetételű, de agár nélküli folyékony táptalajba oltjuk át ás rázott kultúrában tenyésztjük 11 napig, majd ismét átpasszírozva (homogenizálva), újból felületi kultúrába visszük és ezt az eljárást így felváltva ismételjük a törzs fejlődő- és termelőképes állapotban való tartása céljából. Az említett anyarozs-alkaloidok termelése a találmány szerinti eljárással e törzs felületi vagy alámerülő kultúrában való szaporítása útján történhet. Az alkaloid termelést is az említett, szénforrásként szacharózt, nitrogénforrásként ammóniumszukcinátot, szervetlen sókként pedig kálium-, magnézium-, kalcium-, vas- es cink-kationokat, szulfát-, foszfát-, nitrát- és klorid-anionokat szolgáltató sókat tartalmazó táptalajon folytatjuk le. A termelő kultúrákhoz az inokulumot célszerűen oly módon állítjuk elő, hogy a felületi kultúrából 30 napos korban rázott kultúrába átoltott törzset kb. 11 napig tenyésztjük rázott kultúrában; ezt a rázott kultúrát oltjuk azután át inokulumként a felületi termelő-kultúrába, Ha az alkaloidtermelést alámerülő kultúrában (rázott edényben vagy fermentorban) akarjuk lefolytatni, akkor az említett rázott kultúrából a törzset 15 naponként még újabb rázott kultúrába visszük át és az így kb. ötszöri á tollassal nagyobb fokú termelésre serkentett törzset visszük inokulurnként a termelő kultúrába (levegőztetett fermentorba). Az alámerülő kultúrában való termeléshez ily módon szoktatott inokulum egyébként felületi kultúrában is jól tennél alkaloidokat, A fent említett átoltási műveletek során olyan esetekben, amikor a törzset felületi kultúrából rázott kultúrába, vagy rázott kultúrából felületi kultúrába visszük át, átoltás előtt a tenyészetet, pl. fémszitán történő átpasszírozás útján, homogenizáljuk. A termelt anyarozs^alkaloidok felületi kultúrában történő termelés esetén részben a micéliumból, részben pedig a tápközegből nyerhetők ki. Az alkaloidok kinyerése ezért — ami lényegileg a szabadföldön termelt anyarozs feldolgozása során is alkalmazott, ismert módszerekkel eszközölhető — az elkülönített és megszárított micéliumból és a táptalajból külön-külön, vagy pedig az egész, célszerűen homogenizált termelő kultúrából történhet. Az utóbbi módszert alkalmazzuk alámerülő kultúrában történt termelés esetén is. A találmány szerinti eljárással lefolytatott alkaloidtermelés eredményeképpen a felületi kultúrában kapott mieélium anyarozs-alkaloid (ergometrin, ergokriptin és ergokornin) tartalma szárított állapotban eléri, «sőt meghaladja a 0,6%-ot. Az egész termelő kultúra (mieélium + táptalaj) alkaloidtartalma ilyen esetben 1 és 2 mg/ml között van. Alámerülő kultúrában a fermentációs termék alkaloidtartalma már a fermentáció 7. napián 0,5 mg/ml szintet ér el. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 1. példa: Mind az inokulum tenyésztéséhez, mind a termelő kultúrához az alábbi összetételű táptalajt alkalmazzuk: 100 g szacharóz 10 g ammóniumszukcinát 0,25 g KH2 P0 4 (kristályos) 0,25 g MgS04 (kristályos) 1 g Ca(N03 ) 2 0,125 g KCl 0,009 g FeS04-7H 2 0 0,003 g ZnS04 -7H 2 0 1000 ml vízvezetéki víz. A táptalaj pH-értékét 25%-os ammóniumhidroxid oldattal 5,6-ra állítjuk be. A felületi kultúrák táptalaját 0,25% agár hozzáadásával szilárdítjuk. Az inokulum elkészítése céljából a törzs 30 napos felületi kultúráját fémszitán, üveg dörzsölővel, steril körülmények között átpasszírozzuk, majd 500 ml-es Erleinmeyer-lo>mbikban 200 ml folyékony táptalajba oltjuk és 11 napig rázóasztalon inkubáltatjuk, 20^—22 C° hőmérsékleten. A termelő kultúrát felületi tenyésztéssel, 250 ml-es Erlenmeyer-loimbikbaín, 50 ml mennyiségű, 0,25 g agárral szilárdított táptalajon tenyésztjük. Erre a táptalajra lombikonként 5 ml oly inokulumot oltunk, amelyet 2,5 ml fenti rázott kultúra és 2,5 ml steril víz elegyéből nyertünk, átpaszszírozás útján. A termelő kultúrát 21 napig tenyésztjük 25 C° hőmérsékleten. Ezután a micéliumot elkülönítjük és 60 C°-on megszárítjuk. A szárított mieélium anyarozs-alkaloid tartalma (az ibolyántúli maximális abszorpció és a kromatográfiás meghatározás egyező eredménye alapján) átlagosan 0,6%. A mieélium és a táptalaj homogenizálása útján kapott termék összes alkaloidtartalma 1,2 mg/iml. A termelt alkaloid Macekpapírkroniatogiráfia útján meghatározott összetétele: 30% ergometrín, 20% ergokriptin, 30%) ergokornin és 20% ergotoxin-izomér, 2. példa: Az inokulum elkészítése céljából a törzs 30 napos felületi kultúráját fémszitán, üveg dörzsölővel, steril körülmények között átpasszírozzuk, majd 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban 200 ml folyékony táptalajba oltjuk és 11 napig rázóaisztalon inkubáltatjuk, 20—22 C° hőmérsékleten. Ekkor a lombik tartalmából 20 ml-t egy másik hasonló rázott folyékony táptalajba viszünk át, és ezt a műveletet még négyszer megismételjük. Az így előkészített inokulumot visszük azután a termelő rázott kultúrába, amelyet 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban, 100 ml táptalajjal 7 napig
