150571. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a koriongonadotropin nyers koncentrátumainak tisztítására

.1

1

Megjelent: 1963.

november

15.

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG

SZABADALMI LEIRA

ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL

150.571 SZÁM

Nemzetközi osztály: A 61 k

AE—119 ALAPSZÄM

Magyar osztály: 30 h 1—8

Eljárás a koriongonadotropin nyers koncentrátumainak tisztítására

VEB Arzneimittelwerk

Dresden cég,

Dresden-Radebeul

(NDK)

Feltalálók: Dr. Thieme

Harald Rudolf,

Radebeul,

dr.

Schäffer

Gerhardt Paul vegyészmérnök,

Radebeul (NDK)

A bejelentés napja: 1961. július 12.

NDK-beli elsőbbsége: 1960. október 18.

A találmány eljárás a terhesség első hónapjaiban a terhes vizeletben előforduló koriongonadotropin (HCG) tisztítására.

Ismeretes, hogy a

HCG a

terhesség első hónapjainak vizeletéből különböző adszorbensékkel nyerhető ki. Ismertek továbbá eljárások, amelyekbe a nyers hormont benzoesavval csapják ki. Számos, a peptid-kémia általános módszereit alkalmazó tisztító művelet mellett ismert egy további eljárás, amelyben a HCG közvetlen adszorpcióját a vizelet permutiton át történő szűrésével érik el. A nyers koncentrátum tisztítására eddig kizárólag különböző koncentrációjú szerves oldószerekkel végzett frakcionáló módszereket alkalmaztak. Mindezek az eljárások azonban nagyon körülményesek. Különösképpen kevés munkamenetben nincsen lehetőség tiszta HCG előállítására. A vizeletben ugyanis nagy mennyiségű ballasztanyag és pigment van, amelyek a HCG-t a tisztító eljárás minden fokozatán csökönyösen végigkísérik.

Tiszta HCG előállítására ennek következtében számos munkamenetre van szükség; ezáltal viszont termelés veszteségek következnek be.

Különböző glanduláris proteo-hormonok, pl. ACTH és JCSH, valamint kallikrein tiszta állapotban való előállítására ismertek továbbá olyan eljárások, amelyekbe a hormonokat 9-helyzetben bázikusan szubsztituált akridinvegyületekkel kezelve nehezen vagy egyáltalán nem oldható adszorpciós vegyületek alakjában kicsapják és ilyen módon különítik el.

Olyan eljárást kellett találni, amelyben a HCG- koncentrátumok megszabadítása a pigmentektől és más ballasztanyagoktól kevés munkamenetben lehetséges.

A találmány szerint megállapítottuk, hogy a HCG-hez csökönyösen tapadó vizelet-ballasztanyagok, különösen a nagyon zavaró vizeletpigmentek akridinvegyületek, különösen 2-etoxi-6,9- “diaminoakridinlaktát alkalmazásával szelektíve eltávolíthatók. Ezzel kapcsolatban meg kell említenünk, hogy a HCG nem ad oldhatatlan adszorpciós vegyületet és ezért frakcionálásikor oldatban marad.

Megállapítottuk továbbá, hogy az eljárással a HCG-hez tapadó, a vizeletből származó toxinok, amelyek a termék erősen pirogén voltát idézik elő, ugyancsak eltávolíthatók.

Az egyszerű acetonos frakcionálással összekapcsolva a HCG nyers preparátumaiból kevés lépésben terápikus alkalmazásra jól megfelelő HCG-t lehet előállítani.

1. példa:

Katzman és

Doisy benzoesavas módszere szerint terhes vizeletből előállított 10 g, 100 i. E/mg tisztaságú nyers hormont kétszer 100—100 ml acetátpufférőidattal 4,8 pH-n egy-egy órás keveréssel jégfürdőben extrahálunk. A barna, opaleszkálóan zavaros extraktumokat egyesítjük és centrifugáljuk. Ezután állandó kavarás közben vékony sugárban jéghideg acetont adunk hozzá 45% koncentráció eléréséig.

A keveréket egy óra hosszat hűtőszékrényben tároljuk, majd a kívánt csapadéktól centrifugálással elkülönítjük.

A most már teljesen tiszta oldatból a hatóanyagot az aceton koncentráció 70%-ra növelésével kicsapjuk. 15 percig a hűtőszekrényben állni