150512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B 2 és B 12 vitamintartalmú koncentrátum előállítására eremothecium ashbyi és rhizobium meliloti törzsek társított tenyészetével
2 150.512 volt. Az intermedier anyagcseretermékek esetleges toxikus hatását kölcsönösen úgy ellenőriztük, hogy a különböző korú tenyészetekből készített szűrletek különböző mennyiségét adagoltuk a színtenyészetekhez. Kitűnt, hogy egyik mikroorganizmus sem termel a másikat károsító anyagokat. Mivel azonban az Eremothecium ashbyi tenyésztési ideje 96—120 óra, a Rhizobium meliloitiié pedig csak 24—28 óra, előnyösnek találtuk, hogy ha az eremothecium fermentáció 48 órája körül az Eremothecium ashbyi tenyészetet rhizobium inokulummal „fertőztük”. A találmány értelmében tehát a fermentáláshoz az Eremothecium ashbyi ill. a Rhizóbium meliloti’ törzsek előzetes szelekciója alapján kiválasztott és szaporított variánsát (X| ill. F 12) használjuk. A fermentáláshoz asszimilálható szénhidrátot, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó táptalajt készítünk. Ügy találtuk, hogy adott fermentálási feltételek mellett a B2 és B12 vitaminok hozamát a szénhidrát (C) és a nitrogénforrás (N) arányának beállításával optimális értékre hozhatjuk. Előnyösen a szerves nitrogénvegyületek össznitrogén értéke a táptalajban 0,2—0,4 g %, a szénhidrát mennyisége pedig 1,0—• 4,5% között változhat. A fermentálást aerob feltételek mellett, vas készülékben végezzük. A táptalaj egy literjére számítva percenként 0,3—1,0 liternyi mennyiségű levegőt fúvatunk át a tenyészeten. A fermentálás időtartama 27—29 C° közötti hőmérsékleten 96 óránál rövidebb, előnyösen 60—82 óra. A megfelelőén összeállított táptalaj összes alkotórészét előnyös együtt sterilizálni. Előbb az Eremothecium ashbyi tenyésztését kezdjük el és csak a fermentáció 48. órája körül oltjuk a B2 vitamin fermentátumhoz a Rhizobium meliloti' friss tenyészetét (inokulumát). A fermentálást az Eremothecium ashbyinek megfelelő feltételek mellett még 24—32. óráig folytatjuk. A fermentátumban levő két vitamint könnyen elválaszthatjuk, de ez szükségtelen, mert mindkettő azonos módon kerül feldolgozásra. A fermentlé felmelegítése, bepárlása és porítása útján kapott koncentrátum tehát mind a két vitamint tartalmazza. A találmány szerinti eljárás kivitelére az alábbi példákat adjuk meg: 1. példa: A fermentáláshoz az Eremothecium ashbyi törzs Xi variánsát használtuk. Az inokulum táptalajt 6 napos ferdeagar tenyészetről 5 ml élettani sóoldattal készített szuszpenzióval (1%) oltottuk és 28 C°-on 48 óráig rázógépen tenyésztettük. Az inokulum táptalaj összetétele a következő: XIX Pékélesztő kivonat sz. a. 1,5 % Glukózé 2,0 % Kukoricalekvár sz. a. 0,5 % MgSO4 • 7H2O 0.05% KH2PO4 0,15% Pepton 0,5 % Víz pH = 6,6 A fenti és a következő táptalajokat 120 C°-on 20 percig sterilizáltuk. A steril és jól növekedett inokulumból az oltandó táptalaj 2%-ának megfelelő mennyiséggel oltottuk a kísérleti táptalajokat. A Rhizóbium inokulumot a következőképpen készítettük el: 24—48 órás ferdeagar tenyészetről 5 ml fiziológiás vízzel készített szuszpenzió 1%-ával oltottuk az inokulum táptalajt, amelynek összetétele a következő: L Víz pH = 7,8 K2HPO4 0,05 % kh2po4 0,05 % MgSO4 • 7H2O 0,05 % KC1 0.02 % FeSO4 • 7H2O 0,002 % CoC12-6H2O 0.0012% Krumplicukor 3,0 % Pékélesztőkivonat sz. a. 4,0 % Kazein (hidrolizátum) 1.5 % 27 C’-on síkkörázón 48 óráig tenyésztettük az inokulumot. Ebből az Eremothecium ashbyi tenyészet 5%-ának megfelelő mennyiséggel oltottuk az Eremothecium kultúrákat. Kontroliképpen színtenyészetekben is vizsgáltuk az Eremothecium ashbyi, valamint a Rhizóbium melilotii variánsok aktivitását. Ehhez felhasználtuk az eredeti és a módosított termelő táptalajokat is, melyeknek összetétele a következő: LXIH. eredeti B2 NaCl 0,1 % MgSO4 • 7H2O 0,07 % FeSO4 ..7H2O 0.005 % MnSO4 • 0,0025% CaC2 0,05 % ZnSO4 0.0025% Kukoricalekvár sz. a. 0,5 % Maláta . 2,5 % Sörélesztő 0,5 % Glukózé 1,0 % Pepton 0,5 % Sertéshús kivonat 1,0 % Víz pH = 6,6 LXIV. módosított B2 táptalaj összetétele azonos a LXIII-as jelű táptalajjal, de 0,0018% CoCl2-dal és 0,015<»/0 FeSO4-tal egészítettük ki. LXXII. eredeti Rhizóbium táptalaj Szuperfoszfát 0,214 % KOH 0,065 % MgSO4 ■ 7H2O 0,05 % KC1 0,02 % FeSO4-7H2O 0,020 % CoCl2 0.0018% Krumplicukor 2,0 % Kukoricalekvár sz. a. 2,4 % Sörélesztő autolizátum ö. N. X 0,0354% Víz pH = 6,8 A tenyésztést 28 C° hőmérsékleten síkkörrázógépen végeztük. A tenyészetek vitamintartalmát a 48. órától kezdve rendszeresen ellenőriztük.
