150473. lajstromszámú szabadalom • Eljárás neomycin előállítására
150.473 3 A találmányunk szerinti törzzsel a neomycin termelése aerob körülmények között, a fermentációs iparban használt készülékeikben, steril módon, fehérjét, szénhidrátot és szervetlen sókat tartalmazó táptalajon történik. Fenérjeíorrásként szójaliszt, kukoricalekvár, kazein-hidrolizátum alkalmazható. Szénhidrátforrásiként keményítőt, glükózt, szor'bitot, glicerint használhatunk. A fermentációt 24—31 C° között, célszerűen 28 C°-on végezzük. A neomycint szüretlen vagy szűrt fermentléből ismert módszerekkel egyaránt kinyerhetjük. Szűrés alkalmazása esetén célszerű a pH-t savasra vagy lúgosra beállítani és a ferment! evet szűrés előtt 80—100 C°-<ra felmelegíteni. Eljárásunk kivitelezését az alábbi példa szemlélteti: A Streptomyces flavoalbus törzset burgonyaléglükoz agáron tenyésztjük, a keletkező spórákat víz segítségével lemossuk és a kapott spóraszuszpenziőt használjuk az inokulum oltására. 100 literes inokulumkészülétaben az alábbi összetételű táptalajt készítjük: keményítő 3%, szójaliszt 2%, kukoricalekvár 0,2%, nátriumklorid 0,3%, kálciuimkarbonát 0,5%, pálmaolaj 0,2%,. A táptalaj pH-ja 8,8—7-es értéken van. Sterilizálás után a fent leírt módon készített oltóanyaggal beoltjuk az mokulumkészüléiket és percenként 100 liter levegőátbuborékoitatás közben 28 C°-on sterilen növesztjük a mikroorganizmust. 48 óra múlva, amikor a tenyészet már megfelelően kinőtt, az inofculumot átoltiuk egy 1000 literes fermentorba, melybe az alábbi táptalajt készítjük: keményítő 3%, szójaliszt 2%, kukoricalekvár 0,2%,, nátriumklorid 0,3%, káleíumkarbonát 0,5%, pálmaolaj 0,2%, kazein 0,1%, kobaltnitrát 1 mg/liter. A fermentációt 28 C°-on 1000 liter levegő percenkénti átbuborékoltatésa és keverés mellett 72 órán keresztül folytatjuk, amikor is a ferment!é 1600 E/ml aktivitást ér el. A fermentáció befejezéseikor a pH-t keverés közben oxálsavval 2—3 közé állítjuk be, majd a fermenílevet 100 C°-ra melegítjük. A 100 C° elérésekor azonnal hűteni kezdünk és 70—80 C° között megkezdjük a micélium leszűrését. A szűrlet térfogata 850 liter, aktivitása 1,500 E/ml. A szűrlet pH-értélkét keverés közben 8 értékre állítjuk nátriumhidroxid oldattal, majd 10 liter Amberlit IRC 50 gyantát keverünk a lébe, amelyet előzőleg ammónia oldattal ammónia ciklusba vittünk. A gyantán való megkötés után a fermentlében 150 E/cm3 aktivitás maradt. A gyantát ioncserélő oszlopba töltve' desztillált vízzel kimossuk, majd 0,8—0,9% NH4OH tartalmú vízzel eluáljuk. A nagy koncentrációjú frakciókat egyesítve 30 liter 35 0O0 E/ml aktivitású oldatot kapunk. Ezen egyesített frakciókat cc. HCl-el pH-3 értékre savanyítjuk, szenezzük, majd 1/10 térfogatra való bepárlás után ace bonnal a nyers Neomycin HC1-4; kicsapjuk. Ennek metanolból való újbóli kiesapásával 1270 g 710 E/mg aktivitású, gyógyászati célra alkalmas terméket nyerünk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás neomycin előállítására, melyre jellemző, hogy az Országos Közegészségügyi Intézetnél 1960. december 3-án 601.205 egyszám alatt K12 jelzéssel deponált Streptomyces flavoalbus nov. sp. törzset, illetve ennek variánsait és/vagy mutánsait szénhidrátot, fehérjét és ásványi sót tartalmazó táptalajon tenyésztjük és az így kapott fermentléből a terméket önmagukban ismert módszerekkel elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a tenyésztést 24—31 C° között, célszerűen 28 C°-on végezzük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 632156. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23.
