150243. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fermentlevekből bioxidáció útján nyert delta-1-dehidro-17 alfa-metiltesztoszteron elválasztására 17 alfa-metiltesztoszterontól

2 150.243 Oldhatósági táblázat. Oldószerek 17--alfa-meitiltesztoszteroii DeiLta-l-d< -17-alfa-rr 2'hidroletilíesztoszteron petroléter 0,077 % 0,072 % széntetraklorid 1,35 % 1,84 % benzol 6,9 % 25,4 % éter 1,36 % 1,7 % kloroform 106 — % 159,— % diklóretán 32,— % 60,5 % etilacetát 6,— % 17,2 % aceton 9,1 % 17,4 % metanol 18,2 % 8,3 % etanol 21 — % 29,5 % n. propilalkohal 19,1 % 52,— % víz 0,005 % 0,010 % (A vizsgálatok szobahőmérsékleten történtek.) Találmányunk eljárás fermentlevekből biooxidáció útján nyert delta-l-dehidro-17-alfa-metiíteszitoszteron elválasztására 17-olfa-ffnetiltesztoiszterontól, melyre jellemző, hogy miután a f érmen tlébői izolált nyers terméket széntetraklorídos mosással vagy kristályosítással a 17-alf a-metiltesztoszterontól megtisztítottuk, a 17-alf a-metiltesztoszteronra feldúsult anyalúgból nyert maradékot pirrolidinnel reagáltatva a 17-alfa-metiltesztoezteron enamin vegyületét képezzük, utóbbit sósavas só formájában az elegyből elkülönítjük és a változatlan delta-l-deihidiro-17-alfa-metiltesztoszteront az oldatból kinyerjük. A.z enamin vegyület utólag elbontható, abból a 17-alia-metiltesztoszteron regenerálható és ismét felhasználható mint szubsztráturn mikrobiológiai oxidációkhoz. Ily módon az elválasztással nemcsak a főtérinek tisztítását valósítottuk meg, hanem mód nyílik a jelenlevő kiindulási anyag gazdaságos vissza•nverésére is. A kristályosítási anyalúgokban a 17-alfa^metiltesztoszteron delte-l-dehidro-17-alfa-metiltesztQ-szteron arány erősen megnövekszik, úgyhogy a 17-alfa-metiltesztoszteron mennyisége a 30— 40%-ot is elérheti. Ebben az esetben a széntetraklorid mint elválasztó közeg gyakorlatilag azért nem alkalmazható, mert igen nagy számú átisristályo-sításra volna szükség. További elválasztási lehetőség után kutatva, mivel egy delta-l,4-kettőskötés-rendszer és egy delta-4-kettőskötés nem egyenlő mértékben csökkenti a vele konjugált 3-keto- csoport elektrofil jellegét, úgy találtuk, hogy ez a körülmény kihasználható a szerkezetileg igen közel álló két vegyület elválasztására szekunder aminekkel létrejövő enamin vegyület képzésnél A szántetrakloridos oldat, illetőleg anyalúg bepárlási maradékából sikerült a 17-alía metiltesztoszteron pirrolidin enamin származékát mint sósavas sőt előállítanunk. Ezzel szemben a delta-1-dehidro származékból hasonló viszonyok között nem képződött enamin, így a szelektív reakcióval a két anyag elválasztását meg lehetett valósítani. Eljárásunk lényege, hogy a fermentáció befejeztével a szteroidokat vízzel nem elegyedő oldószerrel, előnyösen 1,2-diklóretánnal a fermentléből kivonjuk, amennyiben a fermentlé a biooxidáció szempontjából előnyös hatású fenolokat, vagy naftolokat tartalmaz, azokat híg lúgoldattal eltávolítjuk, majd a szűrt kivonatot szárazra pároljuk. A nyers terméket széntetrakloriddal iszapoljuk, vagy kristályosítjuk a 17-alfa-metiltesztoszteron eltávolítására, majd a gyógyászatilag hatásos delta-l-deihidro-17-alfa-metiltesztoszteront szűrés és mosás után megszárítjuk. A széntetrakloridos anyalúgiból előállított kristályos maradékot benzolos közegben pirrolidinnel forralva és a képződő vizet leválasztva előállítjuk a 17-alfa-imetiltesztoszteron-pírrolidin-enamin vegyületét, majd ennek sósavas sóját. Utóbbit mint oldhatatlan vegyületet az elegyből elkülönítjük, majd a pirrolidinnel el nem reagált delta-l-dehidro-17-alfa-metiltesztoszteroint az oldatból bepárlással kinyerjük. Az enamin vegyületből a 17-alfa-metiltesztoszteront felszabadítjuk. Példák: 1. 200 liter fermentievet, melybe fermentáció során 40 g 17-alfa-metiltesztoszteront adagoltunk először 33,3 liter, másodszor 16,6 liter 1,2-diklóretánnal kivonunk. A_z egyesített, kivonatokat 3 literre beszűkítjük, híg lúgos mosással a be-tanaitóltói mentesítjük, szűrjük, majd szárazra pároljuk. Száraz maradékként kb. 38 g nyers terméket kapunk. Ebből széntetrakloridos átkristályosítással 2" g delta-l-dehidro-17-alfa-metiltesztoszteront nyerünk. Az átkristályosítási anyalúgot szárazra pároljuk és éterrel kezelve további 4 g kristályos anyaghoz jutunk. Az így kapott 4 g 25% 17-alfa-metilíesztoszteron tartalmú deíta-l-dehidro-17--alfa-metiltesztoszteront 70 ml benzolban oldva 1,2 ml pirrolidinnel 3 órán át visszafolyó hűtővel forraljuk vízkidesztillálő feltéttel ellátott készülékben. Ezután az oldatot nitrogénáramban szárazra pároljuk, A nyert olajos maradékot 20 mi benzolban felvesszük és 30 ml étert adunk hozzá. A kapott oldatból keverés közben 0,5 normál éteres sósav hozzácsepegtetésévcl lecsapjuk a 17-alfa-nietilteszto8z:tieronplirrolidilenaiminhidrokloridot. Az oldatot leszűrjük, a szűrletet híg lúggal savmentesre mossuk, majd szárítás után bepároíjuk. A nyert terméket széntetrakloridból átkristályosítjuk, így 2.1 g delta-l-dehidro-17-alía-metiltesztoszteront nyerünk. O. p.: 160—164 C°. -,20 Fajlagos f orgatóképesség: Í«]D" = 0—+2° (c = 2, kloroform), 17-alfa-metiítesztoszterOin-tartalom 2% alatt, A csapadékot 30 ml diklőretánban felveszszük, 30 ml 5%-os nátriumhidroxid oldattal kevertetjük 60 C°-on 40 percig. A diklóretános. fázist semlegesre mossuk és szárítás után bepároljuk. A bepárlási maradékot metanolos oldatban aktív szénnel derítjük és víz hozzáadásával kristályosítjuk. 900 mg kb. 25% delta-l-dehidro-17--alfa-metiltesztoszteron tartalmú 17-alfa-metiltesztoszteront nyerünk. 2. Az 1. példa szerint kapott szárazra párolt terméket 180 ml éterben vesszük fel. 0,5 normál sósavas éter hozzácsepegtetésére leválik a 17-alfa-•metíltesztoszterori-pirrolidiíenaniin'hidroklorid. A