150128. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vakcinák közbenső termékeinek előállítására

2 150.128 hetjüik. Az ommosásból ill. toroköblítésből származó termék egyéb járulékos mikroorganizmusokat is tartalmazhat, ezért nagyon célszerű a vírus tenyésztésére használt 'közeghez egy- vagy többféle antibiotikumot is .adni e kísérő tnikiroorganizmusok elpusztítása oéljából. Előnyös tehát olyan közeget alkalmazni, amely megfelelő menynyiségi arányban penicillint és sztreptamicini, valamint egy megfejelő goimbaellenes szert, pl. mikosztatint is tartalmaz. Az élő állati sejteket, ill. szövetet célszerűen a sóoldatban tenyésztett, egy sejtnyi vastagságú eejtréteg alakjában alkalmazhattuk. Azt tapasztaltuk, hogy a legjobb eredményeket — legalábbis a közönséges nátha-vírus törzseinek többsége esetében — akkor érhetjük el, ha a felhasználásra kerülő sejteket a terhesség 3—5. hónapjában végzett hysterotomia útján kapott emberi embriók veséjéből vesszük. A közönséges nátha-vírus bizonyos törzsei tapasztalataink szerint akkor is szaporodnak a fent említett körülmények között, ha az inkubációhoz felhasználásra kerülő szövet ill. sejtek ma jom veséből, pl. Macacus fajtájú, mint Rhesus és Cynomolgus majmok veséjéből származnak. Igen kívánatos biztosítani annak lehetőségét, hogy a találmány szerin'd eljárással készült víruskészítmények vizsgálhatók legyenek, a különféleképpen változtatott kísérleti feltételek mellett előállított készítményeik viszonylagos faatáserőseégének megállapítása oéljából. Kívánatos 'továbbá, hogy olyan vizsgálati módszer álljon rendelkezésre, amely gyártási ellenőrző vizsgálatként is alkalmazható az ilyen vakcinák, ill. vakcina-előállítási közbenső termékek gyártása során. Azt találtuk, hogy valamely adott vírus-készítmény hatáserősségének 'megállapítására felhasználható az a cytopathiás hatás, amelyet az aktív közönséges nátha-vírus részecskék kifejtenek, élő állati sejteken megfelelő közegben történő inkubáció során. Ha az inkubációt a találmány szerinti feltételeknek 'megfelelően folytatjuk le, akkor a fertőző vírus-részecskék által kifejtett cytopathiás hatás gócszerű, körülírt, kiemelkedő képződmények, ún. „plaque"-ok képződését eredményezi, amelyek mikroszkóp alatt könnyen megfigyelhetők. Egy bizonyos inkubációs idő elteltével ezek a ,,plaque"-oik kezdenek megjelenni a sejtrétegben, a kultúra beoltására felhasznált vírus-tartalmú anyagban jelenlevő egyes fertőző vírus-részecskék hatásának eredményeképpen. Ezeket a „plaque"-okat (körülhatárolt foltszerű kiemelkedéseket) e leírásban „primer plaque"-oknak fogjuk nevezni. Az inkubáció folyamián maguk a sejtek további vírus-mennyiségeket termelnek, amelyek az idő folyamán szétterjednek az egész sejtrétegben és újabb ilyen körülhatárolt foltszerű kiemelkedések képződését idézik elő, ezeket e leírásban „szekundér plaque"-oiknak nevezzük. Könnyen belátható, hogy csak a „primer plaque"-ok száma az, amely kielégítő pontossággal jellemzi az eredetileg alkalmazott Víruskészítmény hatáserősiségét. Meg kell jegyezni, hogy a közönséges náthavírusnak nem mindegyik törzse képes a fenti ékben leírt közegben fejlődni; egyszerű kísérlet alapján azonban könnyen megállapítható, hogy valamely adott törzs alkalmas-e az ily módon történő tenyésztésre. Ennek megállapítása az alábbi módon történhet: A vírust a fentebb leírt módon ínkubáltatjuk és mikroszkóp alatt figyeljük a sejteket annak az időnek a folyamán, amikor számottevő menynyiségű „primer plaque" képződik a sejtrétegben, de „szekundér plaque"-ok még nem alakulnak ki; a képződött „primer plaque"-okat megszámláljuk. Előre nem lehet pontosan megállapítani, hogy melyik az az idő, amikor a sejtkultúrát figyelni kell a „primer plaque"-olk megszámlálása céljából, minthogy az ezek kifejlődéséhez szükséges időtartam minden adott esetben többféle tényezőtől, mint a felhasználásra kerülő sejt-anyag minőségétől, a vizsgálat alá vett vírus-törzs természetétől és hatáserősségétől, valamint a kultúra tenyésztésének az adott esetben fennálló feltételeitől fog függni. A megfigyelésre legalkalmasabb idő az inkubáció kezdetétől számított második és tizenkettedik nap közé eshet, pl. az inkubáció utáni ötödik vagy hatodik nap lehet, a kísérleteket végző személy ez irányú tapasztalatai alapján azonban adott esetékben nehézség nélkül .megállapíthatja a imikroszkóppal való megfigyelés legkedvezőbb idejét A ,.primer plaque"ok képződésének időszaka folyamán bármely időben végzett számlálás eredményét egy összehasonlítási alapként szolgáló víruskészítménnyel végzett összehasonlító kísérlet eredményével egybevetve kaphatjuk meg a vizsgálat alatt álló vírustörzsnek az alapul vett összehasonlító törzséhez viszonyított megközelítő hatáserősségét. A fentebb mondottak alapján könnyen belátható azonban, hogy a meghatározás abban az esetben fogja a legpontosabb eredményeket adni, ha a számlálást abban az időpontban végezzük, amikor a „primer plaque"-ok maximális száma képződött már, a „szekundér plaque"-ok képződése azonban még nem kezdődött meg. A találmány szerinti eljárás az eddig ilyen célokra javasolt korábbi eljárásoktól elsősorban az inkubáció lefolytatására alkalmazott hőmérséklet tekintetében különbözik (a találmány esetében alkalmazásra kerülő hőmérsékletek számottevően alacsonyabbak a sejtkultúrák esetében általában alkalmazott hőmérsékleteknél); eltér a találmány szerinti eljárás a már ismert eljárásoktól az alikalmazott pH-érték szempontjából is. A találmány szerinti eljárásban különösen olyan közegek alkalmazhatók előnyösen, amelyek valamely alkáliféim-hídrogénkarbonátot, előnyösen nátrium-hidrogénkarbonátot tartalmaznak 0,001 iés 0,01 mól közötti mennyiségi arányban; a legelőnyösebb hidrogénkarboniát-koncentráció 0,002 és 0,005 mól között van. Felhasználhatók azonban egyéb anyagok is a közeg kívánt pH-értékének beállítására, mint pl. az olyan nátriumfoezfáttompító (puffer), amely a közegben való 0,05 mól végső koncentráció esetén 7,14 és 7,69 közötti pH-értekék beállítására képes. Az előnyös inkubációs hőmérséklet 31 C° és 35 C° között, pl. 32—34 C° lehet. A legjobb eredményeket 33 C° körül, tehát 32,5 C° és 33,6 C° között érhetjük el. Azt találtuk, hogy a szóban forgó vírusoknak a fentebb megadott körülmények között történő i