150099. lajstromszámú szabadalom • Eljárás prednozolon előállítására
150.099 :t azonos időpontban kerül kontaktusba a Hrökortizonnal és a fehérje-szintézist gátló klofenikollal. A keletkezett prednizolon hosszú változatlanul kimutatható a tenyészetben, tednizolont lebontó enzimek nem tud-Mert a pr< ?ííSak kialakulni. A. 3. fermentorban a hidrokortim. l'íionhoz adaptált tenyészet, mint kontroll, jói mukeletkezeít prednizolon nagyfokú elbom'2; péWa: .Absidia orchidis Roux palackban nőtt 10 napos burgonyás agar tenyészetéről 100 ml desztillált vízzel készített spóraszuszpenzió 50' ml-ével beoltottunk 5 liter 0: jelű táptalajt (01 jelű táptalaj: 2% malátakivonat, 1% pepton (Richter) csapvízben, a pH-t sterilszés előtt 5,5-re állítottuk és az 5 liter táptalajt 10 literes Johan palackban 30 percig 121 C°-on sterilizáltuk) A tenyészetet 24 órán át inkubáltuk 25 C°-os vízfürdőben, 300-as percenkénti "fordulatszámmal kevertet tük és ercenként 5 liter steril levegőt fúvattunk át rajta. A 24 órás tenyészet 2 literével 50 liter GAK8 jelű táptalajt oltottunk saválló üzemi készülékben. (GAK8 jelű táptalaj összetétele: l°'c techn. glükóz, 0.5° o aniirraniumszulíát, •tenntéhidredtoalatt ;ll2í" íe-2% nedves kuko'ricalekvár, a pH-t sterilezés előtt 5,5-re állítottuk és a táptalajt 121 C= -on 30 percig sterilizáltuk.) Fermentációs körülmények: 0,2 atm. túlnyomás, keveríetés percenkénti 200-as fordulatszámmal, hőmérséklet 25 C", levegőztetés: 0.5 ti levegő percenként. 48 óra múlva a tenyészetből 25 litert sterilen leengedtünk és a fermentorban maradt 35 liter tenyészethez 35 liter steril vizet kevertünk hozzá. Az - így nyert 70 liter, kétszeresére hígítót tenyészethez, 4 óránként 11.2 g Reichstein-féle S-vegyületet adagol,iúnk, 4 alkalommal, mindig.1120 ml metilalkoholbán oldva. 20 órás fermentálás után, a micéliu^t sterilen kiszűrtük a fermentátumból. A szűrt le.'340 mg hidrokortizont tartalmazott literenként. 5~-5 liter fermentátumot sterilen Johan palac'KQ-Iíba fejtettünk. Az első fermentorhoz 166' ml -?1 órás, KA12-es táptalajon nőtt C: "simplex tenyészetet adagoltunk, a második fermentorhoz .Pedig olyan, ugyanebből a tenyészetből származó 166^ ml-t, amelyet előzetesen 10 mg/100 ml koncentrációban beadagolt J4-androszténdionhoz adaptáltattunk 8 óra hoszat. Az utóbbi fermentorhoz még 0,5 g kloramfenikolt adagoltunk 50" *! desztillált vízben oldva. A fermentációs körülmények azonosak voltak az 1. példában leírtakkal. A 2. táblázat mutatja be a kénsavas kromogénképzés útján nyert meghatározási eredményeket : 2. táblázat 4. 6. 8. 10. 12. 14. 16. 18. 20. 9.9, 240 420 320 480 580 630 600 700 650 760 740 810 700 -800 550 830 480 800 390 810 Az eredmények szerint az Absidia orchidis fernientlevében levő hidrokortizont a hozzáadagolt Corynebacterium simplex tenyészet átalakítja prednizölonná, de a keletkezett prednizolon rdvidesen^ lebontódik. Ezzel szemben, ha a Corynebacterium simplex tenyészetet előzetesen /l4-androszténdionhoz adaptáltattuk és az oxidáltatás kloramfenikol jelenlétében történik, akkor a hidrokortizonból keletkező prednizolon mennyisége a fermentumban hosszú ideig változatlan értéket mutat. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás prednizolon előállítására hidrokortizonból, melyre jellemző, hogy. a /P-kettőskötés kialakítását .mikrobiológiai úton, Corynebacterium simplex species 17-es szénatomon oldalláncot nem tartalmazó szteroidhoz előzetesen adaptáltatott tenyészetével, a fehérjeszintézist gátló anyagok jelenlétében végezzük.' 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli változata, melyre jellemző, hogy szubsztrátumként hidrokortizon helyet Reichstein-féle S-vegyületből Absidia orchidis species tenyészetével nyert, szűrt, hidrokortizont tartalmazó fermentlevet alkalmazunk. - 3. Az 1. és 2. igénj^pontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a 17-es . szénatomon oldalláncot nem tartalmazó szteroidként előnyösen zf4 -androsztendiont alkalmazunk. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy a fehérjeszintézist gátló anyagként előnyösen kloramfenikolt használunk. 'qriásfrt feie! a Közgazdasági és Jos) Könyvkiadó isazcató's :Í?0. Terv Nvomda. Dudapest V., Balassi Bálint utca 21-23.
