149678. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteránvázas vegyületek oldására és adagolására mikroorganizmusok tenyészeteihez
2 149.678 holok'ban oldott egyes sók hatására tetemesen megnő. Különösen szembetűnő az oldhatóságnövekedés kálciumklorid jelenlétében primer, alacsony szénatomszámú alkoholokban; öt—tíz-szeres mennyiségek oldhatók azonos térfogatú oldószerben 10% vízmentes kálciumklorid jelenlétében. Vízmentes magnéziumklorid, káliumjodid stb. jelenléiében szintén észlelhető oldhatóságnövekedés, ez azonban a fenti effektusnál lényegesen kisebb. Ugyancsak kimutatható némi oldhatóságnövekedés akkor is, ha oldószerként szekunder alkoholt alkalmazunk. A szteroid primer alkohol jellege fontos a hatás létrejöttéhez, pl. progeszteron, metiltesztoszteron esetében effektus nem észlelhető. A szteroid és az oldott só között képződött komplex nem izolálható. A jelenség csak alkoholos oldatban létező komplex vegyület képződésével magyarázható. A 2. táblázatban, közöljük a Reichstein-féle S anyag, hidrokortizon és prednizolon oldhatóságát acetonban, alkoholban, illetve sótartalmú alkoholokban (100 g oldatban levő szteroid g-ban). 2. táblázat o C ca "5 •s őü cd ü ä O o cs s° +-»--T a C8 a o 1« U © Q, O RS HC Pr 1,6 2,5 3,6 3,0 5,6 21,5 15,0 37,0 2,4 3.8 19,0 46.0 3,4 40,0 o a cd a o u o ?,o cs cű "^! "= ao zx rt © o o tsa H CU ©^ §2 Pr 2,7 6,5 12,5 HÜ O SD 0) -=> 9,8 (RS = Reichstein-féle S-anyag, HC = Hidrokortizon, Pr = Prednizolon) Mivel a mikrobiológiai átalakítások zöménél az átalakítandó szteroid tartalmaz primer alkoholcsoportot (elegendő utalnunk a Reichtein-féle S-amyag, hidrokortizon, kortizon, dezoxikortikoszteron, kortikoszteron prednizon, prednizolon, a hidrokortizon és prednizolon halogénezett származékainak további mikrobiológiai átalakítására), találmányunk igen széles körben alkalmazható. Ezen kívül tájékozódó vizsgálataink szerint a szteroid komplex fém-vegyületeknek preparatív jelentőségük is van, pl. szennyezett szteroidok tisztításánál, ami további bejelentésünk tárgyát fogja képezni. Találmányunk eljárás szteránvázas vegyületek oldására és mikroorganizmusok tenyészeteihez adagolására, azzal jellemezve, hogy az adagolandó, a fermentátum 1 literére 800 mg vagy ennél magasabb szteroidmennyiség oldására használt oldószer koncentrációját a fermentátumban nullára, illetve olyan alacsony szintre csökkentjük, amely közömbös az átalakítást, végző enzimek biológiai aktivitása szempontjából. 1. példa: Corynebacterium simplex kétnapos burgonyás ferdeagar tenyészetéről 10 ml desztillált vízzel szuszpenziót készítünk és ennek 1 ml-ével oltunk be 100 ml CSS jelű táptalajt (4,4 g KH 2 P0 4 , 8,8 g Na2 HP04-7H 2 0, 20 g sörélesztőkivonat szárazanyag; 1 literre feltöltve) 500 ml-es Erlenmeyerlombikban. A lombikokat 121 C°-on 25 percig sterilizáltuk. A beoltott lombikokat 28 C°-on 200-as fordulatszámú rázóasztalon inkubáltuk 24 órán keresztül. A kapott tenyészet 250 ml-ével oltottunk 5 liter 92%-os kukoricalekvárral kiegészített aszparaginos táptalajt. A tenyésztést 1 térfogat levegő percenkénti átáramoltatása mellett kb. 350/perces fordulatszámmal kevertetve újabb 24 órán át folytattuk 37 C°-ú vízfürdőben. Ezután a tenyészethez 100 ml-enként 500 ml-es lombikokba szétmérve 10—10 mg hidrokortizont adtunk, majd a lombikokat 2 órán át 28 C°-on rázatva adaptáltuk. Az adaptált tenyészeteket alkalmazzuk átalakításhoz. 5—5 liter sterilizált desztillált vizet tartalmazó íermentorhoz 166—166 ml adaptált tenyészetet és 4—4 g hidrokortizont adagoltunk; l-esnél 300 ml acetonban oldva, az acetont a tenyészet adagolása előtt 18 órán át kilevegőztetve. 2-esnél 28 ml 90%-os ecetsavban oldva, majd még a tenyészet adagolása előtt 42 ml 10 n NaOH-dal közömbösítve. 3^asnál 50 ml 10% kalciumklorid-tartalmú metanolban oldva. Az 1. táblázat a képződő prednizolon koncentrációját tünteti fel y/ml-ben kifejezve az idő függvényében. 3. tábla; sat. 4 ó 6 r a 8 10 0 4 ó 6 r a 8 10 12 1. 144 238 354 412 462 572 2. 56 232 320 354 400 464 3. 92 508 608 614 — 736 ó r a 14 16 18 20 22 24 1. 644 644 660 680 680 680 2. 552 696 644 716 736 368 3. 784 624 660 608 — 644
