148963. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új nagyhatású antibiotikum előállítására

4 148.963 A K 152 bázis nehezebb kezelhetőségére való tekintettel a sósavas só előállítása látszott célszerűnek. Az alumíniumoxidos kezelés után kapott halványsárga oldatot, Na2S04-al való szárítás után, vákuumban szirupsűrűségig bepárolva, majd acetonban oldva pár csepp cc HCl és nagyobb mennyiségű éter hozzáadására a K 152 sósavas sója szép sárga csapadék alakjában leválik. A csapadékot éterrel mossuk és vákuumexikátorban szárítjuk. A különböző fermentációkból származó és teljesen azonos fizikai tulajdonságokkal rendelkező minták eléggé eltérő biológiai aktivitással rendelkeztek (100 000 E/mg-tól 24'0O0 E/mg-ig). Lehetséges, hogy szilárd állapotban való tároláskor megy végbe némi inaktiválódás. A K 152 bázis éteres oldatába sósavgázt vezetve sárga tűs kristályok váltak ki, melyek azonban Elementáranalízis: C:47,39% H : 6.66% N : 7,40% Cl : 11,96% 47,47 6,97 7,52 12,17 A C22H34N3O9 2HC1 képletre számított értékek a következők: a szűréskor azonnal elfolyósodtak és absz. éterre]' megszárítva az amorf K 152. HCl-al azonos termék keletkezett. Az eddig előállított legnagyobb aktivitású (100 000 E/mg, majd kb. háromhetes állás után 55 000 E/mg) anyag fizikai állandói a következők: Op.: nincs. Elszíneződik 144 C°-nál, zsugorodás és szenesedés 200 C° felett. Oldhatóság: Jól oldódik: Metanol, etanol, aceton, dioxán, kloroform, n-butanol, 5 mg/ml felett. Mérsékelten oldódik: benzol, toluol, etilacetát 2—5 mg/ml. Rosszul oldódik: éter, széntetraklorid 1 mg/ml körül. Nem oldódik: petroléter, metilciklohexán. A K 152.HCl jól oldódik vízben, alkoholokban, de nem oldódik acetonban és a legtöbb vízzel nem elegyedő szerves oldószerben. 0 : 26,24/diff. C : 47,22% H : 6,81% N : Kvalitatív kémiai reakciók: Biuret, ninhidrin, 2,4-dinitrofemlhidrazon, FeCls, negatív. Ehrlich, Fehling, Tollens pozitív, illetve bizonytalan. Papírkromatográfiásan vizsgálva n-butanol :ecetsav.víz 4:1:5 rendszerben egy hosszú elnyújtott foltot ad <b. subt. agáron), R/:0,65—0,80. Egy 20 000 E/mg aktivitású minta ellenáramú megosztásos vizsgálata azt mutatta, hogy ez az anyag 3 különböző aktív frakcióra bontható a fenti 'módszerrel. Az alkalmazott oldószerpár kloroform: pH 4,25-ös Mcllvaine puffer volt. A 30 csöves készülékben végrehajtott vizsgálat szerint az 7,51% Cl : 12,60% 0 : 25,69% anyag zöme, mintegy 80%, az első három csőben maradt. Ez a három cső tartalmazta a rendszerbe bevitt aktivitás 98%-át (A frakció). A 6—10-es csövek igen kis mennyiségű, az A frakcióhoz minden tekintetben hasonló igen nagy aktivitású anyagot tartalmaznak (B frakció), míg a, 22—27 csövekből egy 700 E/mg aktivitású szép sárga színű anyag (C frakció) volt elkülöníthető. Az első három csőből kipreparált anyag zöldessárga színű. Biológiai aktivitása 36 000 E/mg. Op.: 150 C° körül. Az anyag az ultraibolyában a következő elnyelési maximumot mutatja: max min max : min -- 269 m/i 408 mii - 235 m/A 370 m/A = 282 m/A 408 m/i 538—545 m/i = 250 m/x 360 m/i l°/( '0 ^1 cm E E E 1% 1 cm A szabad bázis tisztán való előállítását megpróbáltuk a sósavas sóból kiindulva megoldani. A K 152.HCl-t kis mennyiségű vízben feloldva, majd az oldatot pH 5-re állítva kaparásra és lehűtésre barna színű amorf csapadék vált le, melyet leszűrve és megszárítva 55 000 E/mg aktivitású barnás port kaptunk. Elszíneződik 80 C°-nál. Olvad, bomlás közben 100—108 C°-on. Az anyag még vákuumban, 40 C°-on foszforpentoxid felett szárítva is higroszkópos. Tömény vizes oldatokból telített pikrinsavoldattal sárga csapadék alakjában lecsapható az aktív anyag(ok) pikrátja. 176 (0,1 n HCl-es etanol) 28 95 25 123 (0,1 n NaOH-s etanol) == 37 = 9 == 77 = 23 A megszárított pikrát aktivitása 12 000 E/mg, Op.: 156—158 C°. A pikrát jól oldódik acetonban és elég jól vízben. 0,05 n sósavban oldva, a pikrinsavat éterrel eltávolítva, az előzőek szerint előállítható a K 152 sósavas sója. A sósavas sóval teljesen azonos úton előállítható a megfelelő kénsavas só is. Sárgásbarna por. 60 000 E/mg. Op.: 120=—140 C° (boml.). A reineckát, helianthát nem állítható elő a pikrátkészítéshez hasonlóan. Stabilitási vizsgálat: 1000 E/mg oldat 1 óra c° pH: 1 2 4 5 7 9 12 20 900 950 950 950 670 100 0 E/ml 60 680 750 850 700 320 25 0 E/ml