148960. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antifungális antibiotikum előállítására
2 148.960 togén gombákkal szemben is. A baktériumok közül a B. subtilist 500 /xg/ml-ben gátolja 37 C°-on 24 óráig inkubálva, míg a következő baktériumokat 1000 jug/ml-iben sem. gátolja: Staph, aureus, E. coli, Ps. aeruginosa, Proteus vulgaris és Myco'b. smegmatis, E baktériumokkal szemben a trichothecln is hatástalan. A gomba malátás agáron felületi tenyészetben kevéssé, peptont, glükózt és sókat tartalmazó táptalajén jobban termeli az antibiotikumot. Az anyag előállítása céljából a gombát felületi, majd süllyesztett tenyészetben is a következő táptalajon tenyésztettük: glükóz 3% pepton 1% Na2 HP0 4 0,01% KH9 P0 4 0,02% CaCl2 0,02% MgSÓ4 0,02% malátakivonat 0,02% FeCl3 0,001% aneurin 50fig/lit, Fermentálás közben a pH 7—7,2, a hőmérséklet 20—24 C°. A fermentáció időtartama süllyesztett tenyészetben 3—4 nap. A fermentáció befejezése után a micéliumot célszerűen elkülönítjük az erjesztéses oldattól, pl. szűréssel. Az erjesztéses oldat pH 7 körül termostabil, alkalikus közegben aktivitását már szobahőmérsékleten is néhány óra alatt elveszíti. Az oldatból szerves, vízzel nem elegyedő oldószerrel előnyösen benzollal vagy széntetrakloriddal kivonjuk a fungicid hatású antibiotikumot. Az oldószeres fázist megszárítjuk nátriumszulfáttal, majd oldószermentesítés után a nyers antibiotikumhoz jutunk, melyet átkristályosítással, előnyösen metanolból tisztítunk. Ily módon színtelen kristályos anyagot kapunk, mely 125 C°-on olvad, fajlagos forgatóképessége +8° és +13,5° között van, (c = 1, kloroform) és amely C, H és O elemekből áll. C : 68,5%, H : 7,6%, 0:25,0%. Molsúlya 250—280 között van. Nitrogént és ként vagy halogént nem tartalmaz. A mellékelt két spektrum egyrészt a trichothecin (1. ábra), másrészt Tv jelzésű antibiotikumunk (2. ábra) infravörös színképét szemlélteti. Az abszcisszák a hullámszámokat tüntetik fel (cm^-ben), az ordináták pedig az áteresztési %-okat. Mint a két anyag spektrumából látható, azok rendkívül nagy hasonlóságot mutatnak, azonban a Tv antibiotikum nem tartalmaz karbonil (keton) csoportot, mivel 1686 om~1 -nél nincs áteresztési minimuma. Ez abból is kitűnik, hogy míg a trichothecinnek előállítható a 2, 4-dinitrofenilhidrazonja, a Tv antibiotikumnál ez a reakció negatív. Az infravörös spektrumok 1,6%-os széintetrakloridos oldatban készültek. A Tv törzs által termelt antibiotikum vízben roszszul oldódik, alkoholokban közepesen, míg benzol, kloroform és széntetraklorid jól oldja. Ugyancsak oldható napraforgóolajban. Az antibiotikum egészen kevéssé toxikus. Egerek faece-A kiadásért felel: a Közgazdasági seben jelenlevő élesztősejtek számát perorálisan 250 mg/kg dózisban csökkenti. In vitro Candida albicans-ra a nystatin-nal közel egyenlő hatású, de inkább fungisztatikus hatást fejt ki. A fermentálást és izolálást az alábbi példával szemléltetjük: 1. példa: . 10 db 100 ml-es rázólombikot megtoltunk a bevezetésben megadott összetételű táptalajjal, azzal a különbséggel, hogy 1% helyett 1,5% peptont alkalmazunk. A lombikok tartalmát a szokásos sterilezés után beoltjuk 2 cső ferdeagarról lemosott conidium szuszpenzióval, majd 24 C°-on rázóasztalon 3 napig rázatjuk. Ezután a lombikok tartalmát egyesítjük és azzal 100 liter táptalajt vasfermentorban beoltunk, melynek összetétele azonos volt a bevezetésben megadottal. 48 órás fermentálás után 1000 liter táptalajt saválló acél fermentorban beoltunk az előbbi 100 literes tenyészettel. 72 óra múltán a imicéliumot szűrőprésen különítjük el, majd a kb. 800 liter szűrt erjesztéses oldatot, melynek aktivitása 300 joig/ml aktivitású nystatin oldatéval egyezett, 2 X 80 liter benzollal extraháljuk. Az egyesített benzolos oldatokat 3 kg vízmentes nátriumszulfáttal megszárítjuk, majd szűrés után gyorsbepárlón oldószenmentesítjük. Visszamarad 100 g nyers termék, melyet 3—4-szeres térfogatú .metanolból szenezés és szűrés után átkristályosítunk. A termék kénsavval sárgás, majd vöröses színeződést ad. Moliseh-próba pozitív, Benedict negatív, Miliőn negatív, Baeyer pozitív. Ferrikloriddal halványsárga, kissé zöldes árnyalatú színeződés. 2. példa: Az 1. példában ismertetett módon járunk el azzal a különbséggel, hogy a szűrt erjesztéses oldatból az antibiotikumot kloroformmal vonjuk ki. A feldolgozás további menete változatlan. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás antifungális antibiotikum- kinyerésére a Cephalosporium genusba tartozó Tv jelzésű és az Országos Közegészségügyi Intézetben 60/205.5. sz. alatt letétbe helyezett törzs, vagy mutánsainak és variánsainak tenyésztésével, melyre jellemző, hogy szénhidrátból, anorganikus vagy organikus nitrogéntartalmú vegyületekből és sókból álló táptalajon 20—28 C° között 5—8 pH-n aerob módon tenyésztjük, majd az antifungális hatású hatóanyagot elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy az antibiotikumot az erjesztéses oldatból szerves oldószerrel kivonatoljuk, majd az oldószer kivonatból elkülönítjük. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, melyre jellemző, hogy az oldószer kivonatot bepároljuk és az antibiotikumot alkoholból, célszerűen metanolból kristályosítva tisztítjuk. és Jogi Könyvkiadó igazgatój;» 614873. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.
