148878. lajstromszámú szabadalom • Eljárás eddig ismeretlen polipeptid előállítására
4 148.878 A maradékot dietiléterrel gondosan mossuk, majd hozzáadjuk 185 g N-karbabenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinilazid [Boissonnas és mtsai., Helv. chim. Acta 38, 1491 (1955)] és 48 ml trietilamin 1500 ml dimetilformamiddal készített oldatához. Az elegyet éjjelen át állni hagyjuk 20 C° hőmérsékleten, majd kétszeres térfogatú acetonba öntjük be. A levált csapadékot leszűrjük, vízzel utána mossuk, majd dimetilformamid és aceton elegyéből átkristályosítjuk. 190 g N-karbobenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolii-í -N-p-toluolszulfonil-L-lizil-glicinamidot kapunk, amely 165 C°on bomlás közben olvad, (a) =—38° (c = 2, dimetilf ormamid). b) N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinü-L-fenil-alanil-L-fenilaianil-azid. 111 g N-karbobenzoxi-S-benzil-L-fenilalanin [Jaquenoud és Boissonnas, Helv. chim. Acta 42, 788 (1959)], 54 g L-fenilalanin-metilészter-hidrokioríd és 35 ml trietilamin 1250 ml acetonitrillel készített elegyéhez 1000 ml piridínt, majd 57 g diciklohexil'karbodiimidet adunk. Az elegyet éjjelen át 20 C° hőmérsékleten állni hagyjuk. Utána az elegyet leszűrjük és a szűredéket vákuumban bepároljuk. A maradékot petroléterrel mossuk és forró metanolból átkristályosítjuk. Ily módon 110 g N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-fenilalanil-L-fenilalanin-rnetilésztert kapunk (op. 163"). Ezt a terméket 88 ml hidrazinhidrát és 3500 ml metanol elegyében 2 óra hosszat melegítjük 60° hőmérsékleten. A csapadékot leszűrjük, maid vízzel és metanollal gondosan mossuk. Ily módon 91 g N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-fenilalanil-íenilalanil-hidrazidot kapunk (op. 210°). Ez utóbbi terméket 11O0 ml dimetilformamid, 830 ml izopropanol és 69 ml 12 n vizes sósavoldat elegyében oldjuk. A lehűtött oldatot 30 ml 5 n nátriumnitrit oldattal, majd 10 perc múlva 4300 ml 0,2 n vizes nátriumhidrogénkarbonát oldattal elegyítjük. A képződött csapadékot leszűrjük, vízzel mossuk, majd vákuum alatt gyorsan megszárítjuk. 90 g azidot kapunk, amelyet azonnal tovább dolgozunk fel. c) N-karbobenzoxi-S-benzil-L-císzteinil-L-fenilalanil-L-fenilalaníl-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszDeinil-L-prolil- « -N-p-toluol-szulfonil-L-l izil-glicinamid. 50 g N-karbobenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-pr olil- s -N-p-toluolszulf onil-L-lizil-glicinamidot 400 ml brómhidrogénsavval telített vízmentes ecetsavban oldunk, majd az oldatot 1 óra hosszat hagyjuk állni 20° hőmérsékleten. Ezután az oldószert vákuumban, 40° alatti hőmérsékleten elpárologtatjuk és a maradékot dietiléterrel gondosan mossuk, majd 32 g N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteimi-L-fenilalanil-L-fenilalanil-azid és 70 ml trietilamin 500 ml dimetilformamiddal készített oldatát adjuk hozzá. Az elegyet két napig hagyjuk állni 20° hőmérsékleten, majd kétszeres térfogatú etilacetátot adunk hozzá, a képződött csapadékot pedig meleg metanollal gondosan mossuk. Ily módon 45 g N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-fenilalaml--L-fenilalandl—L-glutaminil-L-aszparaginil-S-ben^ü-L-ciszteinil-L-prolil-fc-N-p-toluolszuifoml-L-lizil-glicinamidot kapunk (op. 222°), («)21 =—50° (c = 1; dimetilf ormamid). A C75H91O15N13S3 képlet alapján számított értékek: c 59,6% H 6,1% O 15,9% N 12,1% S 6,4% c 59,4%, H 6,4% O 16,0% N 11,7% S 6,5% d) L-ciszteinil-L-fenilalanil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszparaginil-L-ciszteinil-L-ptrolil-L-lizil-glicinamid. 10 g N-karbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-fenilalanil-L-fenllalanil-L-glutaminil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L~prolil-í--N-p-toluofezulfoniJ-L-lizil-glicinamid 2500 ml vízmentes folyékony ammóniával készített oldatához keverés közben annyi fém-nátriumot vagy -káliumot adunk az oldat f orrpontjának megfelelő hőmérsékleten, míg állandó kék színeződés nem áll be. Ezután 1,8 g ammóniumkloridot adunk az oldathoz, majd szárazra pároljuk be. A maradékban kapjuk az L-ciszteinil-L-fenilalanil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszparagínil-L-iciszteinil-L-prolil-L-lizil-glicinamidot. e) (I) polipeptid-vegyület. Az L-ciszteinil-L-fenilalanil-L-fenilalanil-L-glutaminil-L-aszparaginil-L-ciszteinil-L-prolil-L-lizilglicinamidot tartalmazó maradékot 20 liter 0,01 n ecetsavban oldjuk, majd 6,5—8,0 pH-érték mellett, levegő vagy oxigén bevezetése útján 1 óra hosszat oxidáljuk. Ezután az (I) anyagot tartalmazó oldatot 4,0—5,0 pH-értékre állítjuk be, majd 100 g nátriumklorid hozzáadása után szárazra pároljuk be. Ily módon jól eltartható száraz por alakú terméket kapunk, amely ebben az alakban tárolható és felhasználáskor tisztán oldódik. Felhasználható azonban a kapott oldat közvetlenül is, esetleg vízzel vagy sóoldattal történő felhígítás után. 2. példa: Oly módon járunk el, amint ezt az 1. példa a), b), c) és d) pontjaiban leírtuk. A továbbiakban az e) pontban leírt módon dolgozunk, az oxidációt azonban 4,0—6,0 pH-érték mellett, 15 ml 1 mólos vizes hidrogénperoxid oldat hozzáadása útján végezzük (levegő bevezetése útján lefolytatott oxidáció helyett). Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az alábbi (I) képletű, eddig ismeretlen, érszűkítő hatású polipeptid előállítására,
