148864. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 16-metilénszteroidok előállítására

148.864 a fürdőn melegítünk. Ezután vízbe öntjük és a csapadékot, a 16-metilénhidrokortizonacetátot (Vl.a, 11^-OH, R2

= acetil) leszívatjuk. O. p. acetonból váló átkristályosítás után) 207—209°. ci) A Via képletű vegyület (llß-OH, R2 = acetil) 1-dehidrálása vegyi úton. 6 g 16-metilén hídrokortizonacetátot az alanti 3. h2

példában ismertetett módszerrel szeléndióxiddal dehidrogénezzük. A 16-metilén-prednizo^ lon-21-aeetátot (Vl.b, Uß-OIl, R2 = acetil) acetonból átkristályosítva tiszta állapotban kapjuk meg. Előfordul, hogy a kristályok a szelén nyomait makacsul visszatartják. Ezek könnyen eltávolíthatók, ha a szteroidot metanolban feloldjuk és az oldatot fémhigannyal több óra hosszat kavarjuk. c2

=A Via. képletű vegyület (ll/?-OH, R

2

= H) 1-dehidrálása mikrobiológiai úton. 5 g 16-metilén-hidrokortizont, az alanti 3.hi példában ismertetett módon Bacillus sphaericussal dehidrálunk. A keletkező 16-metilén-prednizolon (Vl.b, ll/?-OH, R2 = H) 225—226°-on olvad. d) A Vl.b képletű vegyület (llA-OH, R2

= acetil) elszappanosítása. A 16~metilén-prednizolon-21-acetátnak 16-metilénprednilozonná (Vl.b, 11^-OH, R2

= H) való elszappanosítása a 3. g) példában ismertetett módszerrel történik. O. p. 225—226°, («)D

+

21,9° (dioxánban), / ,max

243 m/x, Ej'^ 427. 3. a) Az V.a képletű vegyület (R2

= H) lla-hidroxilezése. 15 liter megfelelő tápoldatot (pl. 5% glukóz, 0,1% élesztőkivonat, 0,05% szójaliszt, 0,3% NaNOG

. 0,05% MgSC-4 • 7H2

0, 0,lo/

0

KH

2

P0

4

, 0,05% KCl, 0,001% FeS04-H20) kisméretű fermentorban beoltunk a Fusarium sp. (E. Merck-féle gyűjtemény 2083 sz.) jól fejlett rázótenyészetének 750 ml-ével. A tenyészetet erős kavarás és levegőztetés közben 28°-on szaporítjuk és 24 óra múltán hozzáadjuk a Reichstein-féle S-szubsztancia 16-metilénszármazékának 5 g-ját, 40 ml dimetilformamidban oldva. Az átalakulást papírkromatográfiáyal ellenőrizzük. Ha a kromatogramban kiindulási anyag többé ki nem mutatható, a fermentálást megszakítjuk és a tenyészet-oldatot 3-szor. 10 1 kloroformmal kivonatoljuk. Az egyesített kloroformos kivonatokat bepárologtatjuk, a maradékot petroléterrel digeráljuk és acetonból átkristályosítjuk. Tiszta 16-metilén-ll-epihidrokortizonhoz jutunk (Vl.a, lla-OH, R2 = H) o. p. 199—201°, («)D

+41,7° (dioxánban), /

max

241 m

M

E

^^445. b) A Vl.a képletű vegyület (ll«-OH, R2

— H) 21-acetilezése. 2 g 16-metilén-ll-epí-hidrokortizont 10 ml piridinben feloldunk és hozzáadunk 0,36 g ecetsavanhidridet. Az elegyet 15 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, ezután vízbe öntjük, kloroformmal háromszor kivonatoljuk, a kloroformos oldatot, nátriumhidrokarbonát oldattal rázva közömbösítjük, megszárítjuk és vákuumban bepárologtatjuk. Az amorf állapotban visszamaradó 16-metilén-ll-epi-hidrokortizon-21-acetátot (Vl.a, ll«-OH, R2

= acetil) közvetlenül vetjük alá a következő reakciónak. ci = Víz lehasítása a Vl.a képletű vegyületből (ll<x-QH, R2

= acetil). 5 g 16-metilén-ll-epi~hidrokortizon-21-acetátot 25 ml. absz. kloroform és 25 ml piridin elegyében oldunk és 0°-ra való hűtés és kavarás közben 7 g p-toluol-szulfokloridot adunk hozzá. Ű°-on 2 óra hosszat kavarjuk, majd éjszakán át szobahőfokon állni hagyjuk. Ezután az elegyet vízbe öntjük, kloroformmal többször kivonatoljuk, az egyesített kloroformos oldatokat közömbösítjük és 'megszárítjuk. Bepárlás után a maradékot, amely 16-metilén-ll-epi-hidrokortizon-ll-tozilát-21-acetátból áll, metanolból átkristályosítjuk. O. p. 160—161, («)D

+66,6° (kloroformban), / m

ax

229 m.u, E 2

^°

m

433. Ezt az észtert 75 ml jégecetben feloldjuk és 9 g vízmentes nátriumacetát hozzáadása után visszafolyásra állított hűtő alatt 30 percig forraljuk. Az elegyet 500 ml vízbe belekeverjük és a csapadékot, amely nyers 16-metilén-4,9(ll)~preg~ nadié:n-17«,21-diol-3,20-dion-21-acetátból (Vll.at, R2

= acetil) áll, leszívatjuk. A terméket tisztítás végett ecetészterből átkrisályosítjuk. O. p. 210— 212°, (a)D

+42,6° (dioxámban),

max

238,5 m,u, C2

=Víz lehasítása a Vl.a vegyületből

(llß-Oll, R2 = acetil). 0,8 g 16-metilén-hidrokortizonacetátot (melyet a 2.b példa szerint állítottunk volt elő) 8 ml absz. piridinben oldunk, hozzáadunk 0,17 ml tionil kloridot és az elegyet egy óra hosszat gőzfürdőn hevítjük. Ezután az elegyet vízbe keverjük és a kivált nyers 16-metilén~4,9(ll)-pregnadiérí-17a

,21--diol-3,20-dio,n-21-acetátot (Vll.a, R2

= acetil) acetonból átkristályosítjuk.. O. p. 211—212°. d) Albrómossav addicionálása a VII.a képletű vegyületre (R2 = acetil). 7,8 g 16-metilén-4,9(ll)-pregnadién-17«,21-diol-3,20-dion-21acetátot 315 ml dioxán és 40 ml víz elegyében feloldunk, hozzáadunk 4,55 g N-brómszukcinimidet és 1,68 ml 70%-os perklórsavat és egy órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután az elegyet vízbe öntjük, a kivált csapadékot leszívatjuk, vízzel utánamossuk és megszárítjuk. A nyers 16-metilén-9a

-brómhidrokortizon^ -21-acetátot (VIILa, X = Br, R2 = acetil) közvetlenül vetjük alá a következő reakciólépésnek. e) Brómhidrqgén lehasítása a VIILa képletű vegyületről (X, = Br, R2 = acetil). A nyers 16-metilén-9«-bróm-hidrokortizon-21--acetátot feloldjuk 450 ml etanolban és 19 g káliumacetáttal, visszafolyásra állított hűtővel felszerelt lombikban 2 óra hosszat forraljuk. Ezután az elegyet vízbe öntjük. Emulzió keletkezik, melyet kloroformmal többször kivonatolunk és az egyesített kloroformos kivonatokat a szokásos módon feldolgozzuk. A bepárlási maradék, metanolból átkristályosítva, tiszta 16-metilén-9/',ll/?-oxido^4-pregnén-17«,21-diol-3,20-d:o"-2]-