148776. lajstromszámú szabadalom • Eljárás heparin tartalmú kivonat előállítására állati szervekből

Megjelent: 1961. december 31. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 148.776. SZÁM 30. h 1—8. OSZTÁLY — Rí—213. ALAPSZÁM SZOLGALATI TALÁLMÁNY Eljárás heparin tartalmú kivonat előállítására állati szervekből Richter Gedeon Vegyészeti Gyár R. T. Feltalálók: Fari János vegyészmérnök, Kerey György és dr. Molnár Béla vegyészek, mindhárman budapesti lakosok A bejelentés napja: 1960. június 22. A heparin az állati sejtekben előforduló természetes véralvadásgátló anyag, fontos gyógyszer, aminek előállítása nagyipari méretben általában marhatüdőiből történik. Az előállításnak szükségképpen a következő feladatokat teli .megoldania: A sejtekben levő heparint kioldaná, az így nyert híg vizes oldatból, — mely a hepardnnál nagyságrendben több fehérjét és lipoidot tartalmaz, — a heparint kinyerni, majd a továbbkísérő fehérjéktől, dep.resszor és színező anyagoktól .megtisztítani. Ismeretes, hogy a heparin a szövetek ún. Ehrlieh-féle hízósejtjeiben (képződik, ill. fehérjekötésben ott Taktározóidik fel, és indokolja, 'hogy az ismeretes ipari eljárások a heparin kinyerését a szövetek minél alaposabb feltárásával kezdik. Az első iparilag megvalósítható eljárás (Charles és Scott, J. Biol. Ghem. 102, 425 1933.) a megdarált szervet, — általában marbatüdőt — a saját lebontó enzimeivel (ka'tepsin) autolizálja, 16—24 óráig tartó 37°-os hőkezelésééi, majd ammóniaszulfát és lúg hozzáadásával 50° körüli hőkezeléssel segíti elő a kivonatolást, végül hőkezeléssel koaguláltat és a, heparintartalmú levet a szöveti, máradványoktól leszűri. Az így nyert enyhén lúgos nyers léiből, aminek a térfogata k.b. kétszerese a felhasznált tüdőinek, a heparin kinyerése a lé megsavanyításával történik, úgy, hogy annak pH-ját kénsavval 2,0—2,5-re állítják. Ekkor az oldatból a fehérjék egy részével együtt a heparin is lecsapódik. Ez az ülepítéssel és centrifugálásEal tömörített heparin-fehórje csapadék a gyártás nyersterméke, amit ezután fehérjementesítésnek és további tisztítási lépéseiknek kell alávetni. Tapasztalataink szerint az eljárásnak igen nagy hátránya az, hogy az előállított nyers léből a heparin kinyerése savas ki csap ás segítségével igen bizonytalanul valósítható mag, gyakran a heparin nagy része oldatban marad, másrésze kicsapódik ugyan, de olyan kolloid állapotban, hogy ülepítéssel, vagy centrifugálással nem tömöríthető. Máskor viszont a heparin olyan nagy tömegű fehérjével és lipoiddal együtt válik le, hogy a nagy mennyiségű ballaszt anyag jelent feldolgozási nehézségeket. Ezt a nagyipari gyártásnál rendikívül kedvezőtlen bizonytalanságot, az autolízis feltételeinek leggondosabb standardizálásával sem lehet kiküszöbölni, mert az oka nyilvánvalóan az, hogy a feldolgozásra kerülő tüdő már begyűjtésié, vagy tárolása alatt is különböző mértékben autólizálódott. Az eljárásra tehát állandó technológiát csak teljesen friss, vagy teljesen egyformán tárolt, ideális nyersanyagra lehetne kialakítani, ami az ipari gyakorlatiban megvalósíthatatlan. Ezt a hátrányt kiküszöböli a. 2,587.924. sz. amerikai szabadalom, azzal, hogy a szervet előbb hőkezeléssel denaturálja és azután, hosszú ideig tartó. — a szövetek csaknem teljes feloldásáig menő olyan intenzív enzimes proteolízisnek veti alá, ami mellett a szerv eredeti proteolizáltságánalk a foka már nem játszik szerepet. Erre a proteolízisre tripszint, illetőleg pankireársz kivonatot, vagy bakteriális eredetű proteázt alkalmaz. így lényegesen nagyobb nyeredéket >is el tud érni, mint az 'eddig ismeretes eljárások. — 14—22 000 NE. nyers heparint 1 kg tüdőiből. Rendikívül hátrányos azonban, hogy az értékes tripszinbőli, vagy panikreáiszból nagy mennyiségre van szükség,, 2 kg tüdőire 1,5 kg panikreászt, ill. 3 kg pankreász maradékot használ fel, aminek értéke nem áll arányban a hozam növekedésiével, — és így az eljárás ipari alkalmazásban nem terjedhet el. Jelen találmány olyan feltárási módot ismertet, amihez: nem szükséges a külön hozzáadott költséges enzim és a hosszú ideig tartó protieolízis, viszont mégsem függvénye a bizonytalan fokú autólízisnék és emellett maximális nyeredéket biztosít még a hosszú ideig, akár kedvezőtlen körülményeik között tárolt nyersanyagból is.